Определение присутствия бактерий кишечной палочки

Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки расщеплять _пред образовывать на средах «ХБ» и Хейфеца кислые продукты, изменяющие цвет индикаторов, входящих в состав этих сред.

По 1 см³ каждого разведения вносят (по выбору) в пробирки, содержащие по 5 см³ среды: Эйкмана, Кесслера, Булира, Хейфеца, «ХБ» или КОДА. Посевы помещают в термостат при температуре 43^оС для первых пяти сред и 37^оС для последней.

Через 24 ч учитывают рост на среде Эйкмана по помутнению среды и образованию газа, на средах Кесслера,Булира, Хейфеца, «ХБ» и КОДА – по изменению цвета сред. Титр кишечной палочки устанавливают по наибольшему разведению, в котором еще наблюдался рост.

Из пробирок, где наблюдается рост микробов, производят посев в количестве 0,1 – 0,2 см³ на плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина) и выдерживают втермостате при температуре 37^оС в течение 18-24 ч.

Типичные колонии Е. соli характеризуются круглой формой; выпуклой или слегка приподнятой в центре поверхностью, ровными краями, розового, красного или малинового цвета с металлическим блеском или без него на среде Эндо и фиолетового или черного — на среде Левина.

Выросшие изолированные колонии (не менее 4) пересевают на мясопептонный бульон, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 18 -24 ч. После этого одну часть пробирок используют для приготовления мазков, посева на дифференциально-диагностические среды, заражения мышей, вторую — для приготовления кипяченого антигена.

У выделенных культур изучают морфологические,культурально-биохимические и патогенные свойства с целью проведения их родовой дифференциации. Культурально-биохимические свойства изучают по комплексу ЛИМАЦ (лактоза + индол + метилрот + реакция Фогес-Проскауэра - усвоение цитратно-аммонийных солей).

Одновременно с определением морфологических, культурально-биохимических и патогенных свойств бактерий проводят серологическую идентификацию культур кишечной палочки по О-антигену.

Для приготовления антигена каждую предназначенную для типизации суточную агаровую культуру (пробирку со скошенным агаром) смывают стерильным физиологическим раствором, доводят суспензию бактерий до концентрации 5-6 млрд./см³, кипятят в водяной бане в течение 1 ч и ставят реакцию агглютинации на стекле с комплексной 0-сывороткой, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:5.

Если комплексные О-колисыворотки в начальной реакции не агглютинируют антиген из убитой нагреванием культуры, то готовят из этого штамма суспензию бактерий и автоклавируют ее при давлении 10⁵ Па (1 атм.) в течение 2 ч для разрушения термостабильного А-антигена. Автоклавированный антиген исследуют с сыворотками 08, 09, 0101.