Заливка в желатин

Для исследования липидов в рыхлых тканях и органах, а также.при изучении эмбриональных объектов с успехом применяют заливку в водорастворимый биополимер желатин. Используют прозрачный кристаллический пищевой желатин, из которого готовят 25 % и 12,5 % растворы.

К 25 г желатина добавляют 75 мл 1 % водного раствора фе­нола (карболовая вода) и помещают в термостат при 37 °С. Желатин набухает, и после перемешивания образуется густой 25 % раствор. Из него при разбавлении теплой (37 °С) карболовой водой в 2 раза получают 12,5 % раствор желатина.

Приготовленные растворы разливают в чистые сухие про­бирки для однократного использования и закрывают пробкой. В застывшем состоянии желатин можно долго хранить в темном прохладном месте.

Схема заливки в желатин по Волковой—Елецкому

Залитый в желатин материал режут на замораживающем микротоме. Из полученных срезов удаляют желатин, чтобы из­бежать окрашивания фона. Для этого срезы помещают на 30 мин в 10 % раствор гидроксида калия при 37 °С. Затем их про­мывают в водопроводной воде и окрашивают. Окрашенные срезы заключают в поливиниловый спирт или глицерин-жела­тин.

Приготовление поливинилового спирта: порошок поливини­лового спирта отмывают в 96 % спирте (2 смены), эфире (3 сме­ны) и высушивают. К 16 г отмытого порошка добавляют 100 мл дистиллированной воды, оставляют на 12 ч для набухания. По­лученную массу нагревают в течение 20—30 мин на кипящей во­дяной бане. На поверхности густой мутноватой жидкости обра­зуется пленка с пузырями, которую удаляют, а раствор фильт­руют через 4 слоя марли. Поливиниловый спирт можно исполь­зовать как промежуточную среду для получения постоянных препаратов после резки на замораживающем микротоме. Снача­ла на срез, расправленный на стекле, наносят поливиниловый спирт, затем после образования тонкой пленки (через 6—12 ч) препарат заключают в полистирол или бальзам.

Приготовление глицерин-желатина: к 7 г желатина добавля­ют 41 мл дистиллированной воды и оставляют для набухания 3—4 ч. Затем добавляют 50 мл глицерина и 1 г фенола. Смесь нагревают на водяной бане, постоянно помешивая. Раствор фильтруют через крупнопористый фильтр, разливают по про­биркам, закрывают пробками и хранят в холодильнике.

Срезы ткани, залитой в желатин, полученные на заморажи­вающем микротоме, можно обезводить в спиртах, просветлить в карбол-ксилоле и заключить в бальзам или полистирол.

В других схемах рекомендуют иные концентрации желатина и продолжительность пребывания в нем объектов.