Робота 6. Стерилізація листків

Мета роботи: підібрати оптимальні умови стерилізації листків картоплі,отримати стерильну калюсну культуру.

Матеріали і обладнання: рослини картоплі, вирощенів теплиці,мильний розчин, 70%-й розчин спирту, стаканчики зі стерильною дистильованою водою, концентрований розчин “Білизни”, стаканчики для стерилізуючих розчинів, чашки Петрі зі стерильним калюсним середовищем №1 (табл.8), чашки Петрі зі стерильним фільтрувальним папером, стерильні чашки Петрі, пінцети, скальпелі, спиртівка, спирт, ламінар бокс, парафілм.

ХІД РОБОТИ

1. Приготувати розбавлені розчини “Білизни”(робота 4).

2. Інтактні листки картоплі промити у проточній воді, витримати 1-2 хв. у мильному розчині, промити проточною, а потім дистильованою водою.

3. Промиті листки у боксі занурити у 70%-й етанол на 10-15 сек.

4. Рослинний матеріал помістити у стерилізуючий розчин з відповідною концентрацією “Білизни” і витримати відповідний час (табл. 10).

5. Рослинний матеріал відмити у трьох порціях стерильної дистильованої води (витримати по10 хв.).

6. Для підсушування стерильним пінцетом перенести рослинний матеріал у стерильну чашку Петрі з фільтрувальним папером.

7. Стерильний листок розчленити на експлантати по 5-10 мм, які помістити на живильне середовище.

8. Чашку підписати і закрити парафілмом.

9. Чашки з рослинним матеріалом культивувати у термостаті без освітлення при 25⁰ + 1⁰С.

10. Через 4-7днів визначити оптимальні умови стерилізації. Життєздатність культури оцінити через 25-30 днів: по периметру життєздатного експлантата утвориться калюс.

Результати досліджень представити у таблиці 10.

Таблиця 10