Опыт 2. Буферные свойства раствора белка

Лабораторная работа №8

Белки.

Цель: осуществить качественные реакции на белки, щелочной и кислотный гидролиз белковых веществ, исследовать денатурацию и буферные свойства полипептидов.

Опыт 1. Цветные реакции на белки.

Реактивы и материалы: белки, водные растворы (свежеприготовленные); едкий натр, 2 н. раствор; едкий натр, концентрированный раствор; азотная кислота ( d =1,4 г/см³); сульфат меди, 0,2 н. раствор; уксуснокислый свинец, 0,1 н. раствор; азотнортутный реактив; белая шерсть.

1. Биуретовая реакция. В пробирку помещают 2 капли исследуемого раствора белка, 1 каплю раствора щелочи и 1 каплю раствора сульфата меди. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет, который заметен даже в окрашенной водной вытяжке мяса. Биуретовая реакция связана с наличием в белках пептидных группировок СО-NH-, которые и обусловливают появление окраски при взаимодействии с солями меди.

2. Ксантопротеиновая реакция. В пробирку вводят 3 капли водного раствора белка и 1 каплю азотной кислоты. Появляется белый осадок. При нагревании реакционной смеси раствор и осадок окрашиваются в ярко-желтый цвет. Смесь охлаждают и добавляют 1-2 капли едкого натра. При этом желтое окрашивание переходит в ярко-оранжевое.

Ксантопротеиновая реакция обусловлена наличием в белках ароматических аминокислот. Желтое окрашивание появляется как результат нитрования ароматических ядер. Появление оранжевой окраски определяется образованием более интенсивно окрашенных

анионов.

3. Реакция на серу. В пробирку вводят комочек белой шерстяной пряжи, 2 капли раствора едкого натра, каплю раствора уксуснокислого свинца и нагревают содержимое пробирки в пламени горелки. Появляется коричнево-черный осадок сульфида свинца. Эта реакция на содержание серы в белках. Ее дают белки, содержащие цистин, цистеин и метионин.

4. Азотнортутная реакция белков.В пробирку помещают 2 капли раствора белка и 1 каплю азотнортутного реактива, встряхивают содержимое пробирки и нагревают. Появляется характерное красное окрашивание. Эту реакцию дают белки, в состав которых входят аминокислоты, содержащие свободный фенольный гидроксил (тирозин, триптофан).

Опыт 2. Буферные свойства раствора белка.

Реактивы и материалы: белки, растворы; соляная кислота (d = 1,19 г/см³); едкий натр, концентрированный раствор; конго красный, раствор; фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор.

1. В пробирку наливают каплю соляной кислоты, 15 капель дистиллированной воды и тщательно взбалтывают. Одну каплю этого раствора переносят в другую пробирку и добавляют еще 15 капель воды.

К полученному очень разбавленному раствору соляной кислоты добавляют 2-3 капли конго красного. Появляется синее окрашивание. В чистую пробирку помещают 3 капли раствора белка и 1 каплю окрашенного в синий цвет раствора соляной кислоты. Окраска меняет цвет на розовый. Следовательно, уменьшается концентрация водородных ионов.

2. Готовят очень разбавленный раствор едкого натра (точно так же, как и соляной кислоты) и добавляют 2-3 капли фенолфталеина. Раствор щелочи окрашивается в розовый цвет.

В чистую пробирку помещают 3 капли раствора белка и 1 каплю окрашенного раствора щелочи. Розовая окраска исчезает. Следовательно, уменьшается концентрация гидроксильных ионов. Белки амфотерные вещества. Они могут в растворе связывать как водородные ионы, так и гидроксильные (буферные свойства). В первом опыте белок реагировал как основание, во втором – как кислота.