Определение концентрации субстратов возможно при помощи ферментов

Помимо определения с диагностической целью активности ферментов имеет значение и определение количества субстратов с помощью изолированных и очищенных препаратов ферментов. Для этого к определенному субстрату добавляют избыток фермента в оптимальных для реакции условиях. Затем полученный продукт определяют специальными методами. Пре­имущество такого подхода заключается в том, что в образовании конечного продукта ис­ключено неспецифическое участие других веществ. В качестве примера можно привести

определение концентра­ции глюкозы. Учитывая большую схожесть всех моносахаридов (гексоз) при определении концен­трации глюкозы обычны­ми неферментативными методами разные гексозы дают одинаковые конеч­ные продукты. Естествен­но это ухудшает досто­верность конечных ре­зультатов. Использование фермента в реакциях превращения глюкозы основано на свойстве субстратной специфичности и исключает участие в химической реакции других сахаров. В этом случае определяется концентрация только глюкозы. Кроме высокой специфичности ферментативные методы исследования просты и удобны для проведения. Среди субстратов, концентрацию которых определяют с помощью ферментов - глюкоза, фруктоза, триацилглицерины, лактат, пируват, мочевина, этанол, уксусный альдегид, АТФ, холестерин и др.

Если фермент ковалентно «пришить» к антителу, специфически взаимодействующему с антигеном, количество которого нужно определить, то такой методический прием позво­лит значительно повысить чувствительность и специфичность исследования. Высокая специфичность взаимодействия антигена с антителами в этом методе дополняется высо­кой чувствительностью ферментативной реакции, позволяющей резко увеличить количе­ство образующегося продукта реакции, которое пропорционально числу связавшегося ис­следуемого антигена.