№ | Реактивы и этапы | Опыт | Контроль |
Моча,мл | – | ||
Н2О | – | ||
Спиртовой раствор КОН(2,5%-ный),мл | |||
Перемешивают в течение 1 мин | |||
2,4-ДНФГ(0,1%-ный раствор в 2 М HCl),мл | 0,5 | 0,5 | |
Инкубируют 15 мин при комнатной температуре | |||
Фотометрируют против Н2О(λ=490нм, толщина кюветы 0,5 см). D490 | |||
Dоп–Dк |
Строят калибровочный график зависимости D490 от содержания ПВК по следующим данным
ПВК, мкг | Dоп–Dк |
0,08 | |
0,14 | |
0,29 | |
0,45 | |
0,60 | |
0,78 |
Расчёты. Содержание ПВК в суточной моче (на диурез 1500 мл) рассчитывают по формуле:
Для пересчета содержания ПВК (мг) в единицы количества вещества (мкмоль) надо умножить соответствующие величины на 11,4(коэффициент пересчета). Норма: 10-25 мг/сут, или 114-284 мкмоль/сут.
*Реакция организма на сахарную нагрузку
Принцип метода. У здорового человека однократный приём 50- 100г глюкозы вызывает временное повышение её содержания в крови - пищевую, или алиментарную, гипергликемию. Эта гипергликемия обусловлена тем, что при поступлении сразу большого количества глюкозы печень не успевает утилизировать её полностью и часть глюкозы поступает в кровь. Повышение содержания глюкозы в крови приводит к выделению инсулина, который нормализует её содержание в крови уже через 1.5-2ч. Обычно выделяется избыточное количество инсулина, и уровень глюкозы опускается даже ниже нормы. При инсулиновой недостаточности содержание глюкозы в крови после нагрузки достигает значительно больших величин и сохраняется значительно дольше.
Ход определения. Предварительно у взрослого пациента берут кровь натощак. Затем он принимает внутрь 75г глюкозы, растворённой в 250-300 мл воды. Через 30, 60, 90, 120 и 150 мин после приёма глюкозы определяют её содержание в крови и полученные результаты изображают в виде кривой, где на абсциссе откладывают время взятия крови в минутах, а на оси координат - количество глюкозы, выраженное в моль/л. Такие графики традиционно называются «сахарными кривыми».
На основании приведенных ниже данных (см. таблицу) предлагается построить сахарные кривые, сравнить их между собой и сделать вывод об инсулиновом статусе пациентов А, Б и В. Согласно критериям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) концентрация глюкозы 7,8-10,0ммоль/л-1 в капиллярной крови через 2ч после нагрузки глюкозой свидетельствует о нарушении толерантности к глюкозе, а выше 11,1ммоль/ л-1 о сахарном диабете.
Время взятия крови после приёма глюкозы, мин | Концентрация глюкозы, моль/л-1 | ||
Пациент А | Пациент Б | Пациент В | |
5,9 | 4,5 | 8,0 | |
7,0 | 7,0 | 11,5 | |
9,2 | 7,5 | 11,8 | |
9,0 | 5,5 | 11,5 | |
8,0 | 5,5 | 11,0 | |
7,0 | 5,0 | 11,0 |