Количественное определение аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрасферазы в сыворотке крови

Аспартатаминотрансфераза(АсАТ) и аланинаминотрансфераза(АлАТ)- пиродоксальфосфатсодержащие ферменты.

АсСТ катализирует обратимый перенос аминогруппы от аспартата на α-кетоглурат с образованием глутамата и оксалоацетата.

АлАТ катализирует обратимую реакцию переноса аминогруппы от аланина на α-кетоглурат с образованием глутамата и пирувата(ПВК).

АлАТ содержиться в цитозоле, тогда как для АсАТ известны две формы: цитоплазматическая и митохондриальная.

При поражении тканей аминотрансферазы «вымываются» из поврежденных клеток в кровоток, поэтому определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови имеет важное значение, особенно для диагностики поражений сердца и дифференциальной диагностики болезней печени. Так, при неосложненном инфаркте миокарда уровень АсАТ в сыворотке крови начинает повышаться уже через 4-6 ч. после наступления инфаркта, максимум активности приходиться на вторые сутки и лишь на 5-8-й день активность фермента снижается до нормы. Изменение активности сывороточной АлАТ при этом незначительно.

При инфекционном гепатите (болезни Боткина) и обострении хронического гепатита активности обоих аминотрансфераз в сыворотке крови повышаются (активность АлАТ повышается сильнее). Цирроз печени не сопровождается значительной гиперферментемией.

Цель работы. Определить активность обеих аминотрансфераз в сыворотке крови колориметрическим методом и сравнить полученные результаты с нормой.

Принцип метода. Определение активности обеих трансфераз основано на колориметрическом обнаружении пирувата, образующегося за 1ч инкубации, по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде. В случае АлАТ пируват образуется непосредственно из аланина, а в случае АсАТ пируват образуется из оксалоацетата после декарбоксилирования последнего в щелочной среде:

Аспартат + α-Кетоглурат↔ Глутамат + Оксалоацетат