Молекулярная абсорбционная спектроскопия

Метод молекулярной абсорбционной спектроскопии основан на поглощении электромагнитного излучения молекулами анализируемого вещества.

В молекулярных спектрах поглощения заложена обширная и ценная информация о природе и состоянии молекулы в целом, поэтому молекулярная спектроскопия широко применяется для установления качественного (ИК-спектроскопия) и количественного (фотометрия) состава вещества.

Молекулярный абсорбционный анализ используют главным образом для определения компонентов, характеризующих пищевую и биологическую ценность продуктов (белков, углеводов, жиров, витаминов, кислот, минеральных веществ и др.), а также для оценки глубины процессов, протекающих при производстве и хранении продуктов (гидролиза, окисления, денатурации).

В зависимости от используемой области спектра излучения внешнего источника различают:

– УФ-спектроскопию – абсорбционный анализ в ультрафиолетовой области спектра (10–400 нм);

– спектроскопию в видимой области спектра (400–780 нм);

– ИК-спектроскопию – абсорбционный анализ в инфракрасной области спектра (от 0,8 до 100 мкм).

По характеру регистрируемого излучения, технике измерений и используемой аппаратуре в абсорбционном анализе выделяют:

– колориметрический метод – основан на ослаблении (уменьшении) интенсивности излучения, прошедшего через исследуемый раствор, определяемой визуально относительно стандартного раствора;

– фотоколориметрический метод – основан на поглощении прошедшего через светофильтр излучения и фотоэлектрической регистрации светового потока после его прохождения через исследуемый раствор;

– спектрофотометрический метод – отличается от фотоколориметрического метода тем, что через исследуемый раствор пропускается последовательно излучение каждого из участков спектра, т. е. монохроматическое излучение.

 

Схема однолучевого фотоэлектроколориметра:

1 – источник света; 2 – линза; 3 – светофильтр; 4 – кювета с раствором сравнения; 4~ – кювета с исследуемым раствором; 5 – фотоэлемент; 6 – усилитель; 7 – гальванометр

Отношение интенсивности падающего и прошедшего через исследуемый раствор света называют пропусканием Т, а отрицательный десятичный логарифм пропускания – оптической плотностью D:

	I	= Т;
	I 0
D =–lg T.

 

Оптическая плотность (светопоглощение) зависит от природы вещества и растворителя, температуры и длины волны возбуждающего света и используется в количественном абсорбционном анализе.

Спектр поглощения вещества представляет собой графическую зависимость оптической плотности от длины волны (частоты) возбуждающего света и характеризуется положением максимума λmax, которое определяет энергию электронного перехода.

Этапы количественного фотометрического анализа включают:

– перевод определяемого вещества в окрашенную форму;

– получение спектра поглощения исследуемого вещества и выбор спектральной области, соответствующей максимуму полосы поглощения определяемого компонента;

– получение зависимости оптической плотности раствора от концентрации вещества, взятого в качестве стандарта при длине волны λmax;

– определение концентрации вещества.

Основным законом, используемым в количественном абсорбционном анализе, является закон Ламберта–Бугера–Бера, связывающий интенсивность света, прошедшего через слой раствора светопоглощающего вещества, с концентрацией вещества и толщиной светопоглощающего слоя:

I = I 0·10

ε λ Сl

,

 

где I, I ₀ – интенсивность падающего света и прошедшего света, квант/(с · см²); ε_λ – молярный коэффициент экстинкции (светопо-глощения) вещества при длине волны λ, л/(моль · см); С – кон-центрация вещества в растворе, моль/л; l – толщина светопоглоща-ющего слоя, см.

 

Молекулярный абсорбционный анализ в инфракрасной (ИК) области спектра принципиально не отличается от анализа в ультрафиолетовой и видимой областях. В основе его лежит взаимодействие вещества с электромагнитным излучением больших длин волн. Излучение с длиной волны от 2,5 до 500 мкм (υ – от 4000 до 200 см–1) вызывает изменение длин связей и валентных углов.

ИК-спектры большинства сложных органических веществ включают значительный набор полос поглощения, относящихся к различным функциональным группам.

ИК-спектроскопия оказывается полезной в качестве дополнительного метода при проведении идентификации веществ после хроматографического разделения сложных смесей, поскольку ИК-спектр более точно характеризует вещество, чем температура плавления, показатель преломления или плотность. При этом наличие эталонов не является обязательным, достаточно сопоставить полученные результаты с имеющимися в литературе справочными данными. Для этого необходима только информация, к какому классу относится определяемое вещество.

Полосы поглощения, относящиеся к связям, соединяющим атомы, электроотрицательность которых значительно различается между собой, например атомы углерода и азота или углерода и кислорода, обычно довольно интенсивны. Интенсивные полосы используют для идентификации функциональной группы только в том случае, если они проявляются в области, характерной для данной группы. Такие полосы называются характеристическими полосами, или характеристическими частотами.

Характеристическая частота ОН-группы – 3630–3610 см^–1, а карбонильной группы С=О – 1900–1580 см^–1. Однако каждый класс карбонильных соединений дает полосы поглощения в узком интервале частот. Например, муравьиный альдегид – в интервале 1745–1740 см^–1, а альдегиды жирных кислот – в интервале 1740–1720 см^–1.

 

 

Сложные эфиры насыщенных жирных кислот характеризуются полосами поглощения в области 1750–1735 см^–1, а ароматические эфиры – в области 1730–1715 см^–1. Инфракрасный спектр амино-кислот характеризуется полосами поглощения, присущими обеим функциональным группам их молекул: карбоксильной (в области 1600–1560 см^–1) и аминогруппы (в области 3130–3030 см^–1).

Инфракрасные спектры являются полным и однозначным источником информации о составе и структуре молекул, благодаря чему ИК-спектроскопия широко используется для идентификации и определения строения сложных органических соединений в пищевых продуктах. При проведении качественного анализа смесей их компоненты идентифицируют путем сопоставления ИК-спектров исследуемого вещества со спектром эталона.

Метод ИК-спектроскопии используют для определения жирно-кислотного состава молока и молочных продуктов и контроля содержания пестицидов и гербицидов в этих продуктах.

Инфракрасную спектроскопию применяют для определения качества масла и жира при хранении. Окислительная порча жиров связана с образованием гидроперекисей и соединений, содержащих карбонильную группу.