2017-11-30
11555
3.1.Определите суть следующих основных понятий
| Биопсия | Метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей (биоптата) из организма с диагностической или исследовательской целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при подозрении на наличие онкологических заболеваний. |
| Фиксация | Метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. |
| Обезвоживание | Способ удаления воды из различных материалов с целью получения обезвоженного продукта. |
| Уплотнение или заливка | Процесс создания блока, достаточно твердого, чтобы быть пригодным для резки (микротомирования). |
| Микротомия | Подготовка гистологических срезов при помощи микротома для последующего микроскопического исследования. |
| Базофилия | Химическое сродство к основаниям, в том числе, к осно́вным красителям. Базофилией в гистологии называют способность клеточных структур окрашиваться основными (щелочными) красителями (азуром, пиронином, гематоксилином и др.), обусловленная кислотными свойствами окрашивающихся компонентов клетки, главным образом нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). |
| Оксифилия | Свойство цитоплазмы и других элементов клетки или волокнистых структур окрашиваться кислыми красителями (эозином, кислым фуксином и др.) |
| Гистохимия | Раздел гистологии, изучающий локализацию различных химических веществ и продуктов их метаболизма в тканях. |
| Авторадиография | Метод изучения распределения радиоактивных веществ в исследуемом объекте наложением на объект чувствительной к радиоактивным излучениям фотоэмульсии. |
| Иммуноцитохимия | Метод морфологической диагностики, в основе которого лежит визуализация и оценка с помощью микроскопа результатов реакции антиген-антитело непосредственно в гистологических срезах. |
| Световая микроскопия | Микроскопия, при которой увеличенное изображение получают с помощью оптического прибора (микроскопа), в структуру которого входят компоненты, использующие пучок света для создания видимого поля. |
| Электронная микроскопия | Совокупность методов исследования с помощью электронных микроскопов микроструктур тел, их локального состава и локализованных на поверхностях или в микрообъемах тел электрических и магнитных полей. |
| Сканирующая микроскопия | Метод анализа поверхностной структуры микрообъекта путем анализа отраженного «электронного изображения» (как правило, при специальном напылении и с применением метода замораживания-высушивания, что позволяет повышать электронную плотность объекта и предотвращать деформации клеточных и др. структур). |
| Морфометрия | Включает совокупность приемов и методов определения геометрических характеристик исследовательских объектов-гистологических препаратов (срезов, мазков, отпечатков и т.п.) и микрофотографий. |
3.2. Отметьте в таблице название основных этапов изготовления гистологического препарата и укажите кратко сущность каждого из них
|
|
|
|
|
|
| Этапы изготовления гистологического препарата | Сущность этапа |
| Взятие материала | Берут кусочки органов и тканей величиной не более 1 см³. Материал желательно получать как можно раньше после смерти людей (метод исследования материала трупа человека — аутопсия). С диагностической целью материал для гистологического исследования может забираться у людей прижизненно с помощью специальных инструментов или во время операций. Этот способ получения материала носит название биопсии. |
| Фиксация | Фиксация – метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. Это достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов). Наиболее существенным изменением, происходящим в тканях под воздействием фиксатора является процесс свертывания (коагуляции) белков. Количество фиксатора следует брать в 20-100 раз больше объема кусочка фиксируемого материала. |
| Помывка в воде | После фиксации материал промывают (чаще всего в течение нескольких часов в проточной воде) с тем, чтобы избавить его от избытка фиксатора и различных осадков фиксирующих жидкостей. Изучить с помощью микроскопа такие фиксированные кусочки органов невозможно, т.к. они не прозрачны. Чтобы кусочек органа можно было микроскопировать, его надо разрезать на очень тонкие пластинки – срезы. Такие срезы получают с помощью микротомов. для того, чтобы резать на микротоме кусочек ткани, ее надо предварительно уплотнить. Это достигается путем пропитывания застывающими жидкостями – расплавленным парафином. Парафин в воде не растворяется, и поэтому промытый после фиксации кусочек ткани необходимо предварительно обезводить, и только затем пропитывать. |
| Обезвоживание | Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка. |
| Уплотнение (заливка) | При заливке кусочки предварительно пропитываются теми жидкостями, которые служат растворителями для парафина (ксилол или толуол). При заливке в парафин кусочки из абсолютного спирта переносятся в смесь абсолютного спирта с хлороформом или ксилолом, взятых поровну, затем чистый ксилол и, наконец, в расплавленный насыщенный раствор парафина в хлороформе, где они находятся в термостате при температуре 37º до 1 суток и более. Дальнейшая заливка проводится в термостате при температуре 54º -56º в трех порциях парафина. Окончательная заливка проводится в парафин с добавлением воска, который наливают в специальные бумажные коробочки или стеклянные чашки, а затем эти коробочки или чашки после появления на поверхности парафина пленки, погружают в воду. Происходит полное затвердение парафина. Кусочки с окружающим их парафином извлекают из коробочек и с помощью расплавленного парафина, наклеивают на деревянные кубики, получаются парафиновые блоки. Уплотнения также можно добиться замораживанием кусочка органа (срочная биопсия). |
| Приготовление срезов | Срезы с блоков изготовляются на микротоме. Наиболее распространены микротомы санный и замораживающий. В специальных устройствах микротома зажимается парафиновый блок и микротомный нож. |
| Окрашивание | Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (растворением в ксилоле). Окрашивание необходимо производить для того, чтобы отчетливо выявить под микроскопом тонкие структуры объекта. По окрашиванию определенных гистологических структур различают краски ядерные (окрашивание ядра), цитоплазматические (окрашивающие цитоплазму), и специальные, окрашивающие избирательно определенные структуры. |
| Заключение среза | Окрашенные и промытые в воде срезы во избежание помутнения обезвоживают в спиртах (70º, 96º), просветляют в карбол-ксилоле, ксилоле, а затем на предметное стекло, где находится срез, помещают каплю бальзама и срез накрывают покровным стеклом. Бальзам представляет собой растворенную в ксилоле смолу одного из видов сосны, растущей в Канаде (канадский бальзам), смолу пихты (сибирский бальзам) или специальную синтетическую среду. При исследовании биопсий с целью уточнения диагноза в гистологических лабораториях прибегают к ускоренной обработке материала. Кусочки тканей и органов при этом проходят те же этапы обработки, но за 5-7 дней. Иногда производится так называемая срочная биопсия, когда в течение 15-80 мин. материал фиксирует, получают срезы, окрашивают их и заключают. Быструю фиксацию производят в 10% формалине, подогреваемом пламенем горелки или с использованием СВЧ-печи. Уплотнения добиваются замораживанием (хлорэтилом, углекислотой или с помощью замораживающего микротома). |
3.3. Основные гистологические красители и реакции (в столбце "результат" заполняется, в какой цвет окрашиваются красителями ядра, цитоплазма, включения, волокна и т.д.)
|
|
|
| Реагент | Результат |
| Гематоксилин | Окрашивает базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. |
| Эозин | Окрашивает эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом. |
| Орсеин | Используется для выявления эластиновых волокон, особенно это актуально в патологической анатомии кровеносных сосудов. Эластические волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет; остальные структуры - в слабо-розовый цвет. |
| Серебрение | Солями серебра используют для выявления нервных клеток, нейроглиальных элементов, периферических нервных волокон и их окончаний, ретикулярной стромы органов, межклеточного вещества эпителия и гладкой мускулатуры, бледных трепонем и др. С целью улучшения качества препаратов срезы после серебра нередко тонируют солями золота, окрашивание в фиолетовый цвет. |
| Железный гематоксилин | Железный гематоксилин Вейгерта должен окрашивать ядра в черный цвет. Если они приобретают коричневый цвет, то это свидетельствует о порче красителя. Железный гематоксилин Гейденгайна окрашивает в черный цвет не только ядра, но и митохондрии, темные диски скелетной и сердечной мышечной ткани и другие структуры. |
| Реактив Шиффа | Позволяет выделить гликоген и гликопротеины (лиловый цвет). Соединительная ткань, хрящ, костная ткань, железистые клетки и структуры ткани почек окрашиваются в лиловый цвет. Ядро окрашивается в синий. |
| Романовский Гимза | Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего. |
3.4.Заполните таблицу, перечислив основные группы красителей, укажите название структур, воспринимающих краситель, и примеры красителей
|
|
|
| Группы красителей | Название окрашиваемых структур | Пример красителя |
| Основные, или ядерные, красители | хроматин ядер, ядрышко | гематоксилин, тионин, кармин, метиловый зеленый |
| Кислотные красители | цитоплазматические структуры клеток, эритроциты | эозин, кислый фуксин, Конго красный (конгорот), эритрозин |
| Нейтральные красители | жиры и липоиды, ядра | судан III, судан IV, метиленовый синий |
