Шаг 4. Наблюдение за ходом реакции

Устанавливают песочные часы. Производят лёгкое равномерное покачивание планшета и наблюдают за изменениями в каплях. Время наблюдения – 5 мин. Возможные изменения в каждой капле:

1) положительная реакция – появление агглютинации эритроцитов, то есть их склеивания. Агглютинация распознаётся визуально: на светлом фоне появляются скопления красного цвета в виде песчинок, зернистости, мелких хлопьев (необходимо хорошее освещение рабочего места).

2) отрицательная реакция – отсутствие агглютинации эритроцитов. Капля остаётся равномерно окрашенной.

Примечание: температура воздуха в помещении должна быть не ниже +15 градусов, иначе возможно развитие холодовой агглютинации эритроцитов – склеивание их при температуре менее 15 град.

Обязательное требование: результат в двух сериях сывороток должен быть одинаковым! Если результат в двух сериях различается, работу необходимо переделать.

Шаг 5. Исключение неспецифической ложной агглютинации.

Известно, что истинная агглютинация - это склеивание эритроцитов, происходящее при встрече одноимённых агглютиногенов и агглютининов. Но при определении группы крови возможно появление и так называемой ложной агглютинации (оседания эритроцитов по типу монетных столбиков), которая может быть ошибочно принята за истинную. Для её исключения во время наблюдения за результатом во все капли, в которых наступила агглютинация, добавляют пипеткой по одной капле физиологического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение. Вносить физраствор необходимо не ранее, чем через 3 мин от начала наблюдения. Под его действием ложная агглютинация исчезнет, истинная останется.

Шаг 6. Исключение неспецифической панагглютинации.

Панагглютинация – феномен, при котором эритроциты склеиваются при смешивании их с любой группой сыворотки. Поэтому заподозрить её наличие необходимо только в тех случаях, когда положительная реакция наблюдается с сыворотками всех трёх групп и серий (агглютинация на плоскости в шести каплях). Для её исключения проводится контрольное исследование с сывороткой IY-группы, не содержащей агглютининов. Капля сыворотки IV группы наносится в седьмое углубление, производится забор крови, смешивание капель и наблюдение в течение 5 мин. Появление агглютинации и в этой капле говорит о наличии феномена панагглютинации и о невозможности определить группу крови данным методом. Отсутствие агглютинации в контрольной пробе позволяет расценивать полученный ранее результат с сыворотками I, II, III – ей групп как истинную агглютинацию.