Коагуляция желатина спиртом

Материалы и оборудование: раствор желатина без добавления щелочи, 96% этиловый спирт, разбавленная (6%) соляная кислота, 0,1н раствор гидроксида натрия, 15% раствор сульфата аммония, пробирки, штативы для пробирок, пипетки, резиновые груши.

ХОД ОПЫТА

В три пробирки помещают по 5 мл раствора желатина. В пер­вую пробирку добавляют 0,5 мл разбавленной соляной кислоты, а в третью - 1 мл 0,1н раствора NaOH. Затем во все три пробирки приливают по 10 мл спирта и встряхивают их.

Коагуляция наблюдается лишь во второй пробирке, в которую не добавлялось ни кислоты, ни щелочи.

ОБЪЯСНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПЫТА

Коллоидные частицы большинства белков гидрофильны, т. е. стабилизова­ны не только зарядом, но и наличием гидратных оболочек. Желатин в раство­рах гидратирован в большей степени, чем другие вводимые в опыты белки, поэтому одного лишь снятия заряда (достижением изоэлектрической точки) недостаточно для его коагуляции (см. опыт 2). Спирт энергично связывает воду и дегидратирует коллоидные частицы белков, в частности желатина. При незначительном заряде частиц, лишенных гидратных оболочек, т. е. вблизи изоэлектрической точки, они коагулируют. В сильнокислой или щелочной среде частицы желатина заряжены гораздо сильнее и благодаря это­му настолько стабилизованы, что дегидратация спиртом уже не вызывает коа­гуляции.

Применяя буферные растворы с различными значениями рН, можно этим же путем найти изоэлектричеекую точку белка более точно; для желатина она лежит в пределах рН 4,7 - 5,0.

ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКОВ КОНЦЕНТРИРОВАННЫМИ МИНЕРАЛЬНЫМИ КИСЛОТАМИ

Материалы и оборудование: растворы белков – молочного альбумина, яичного альбумина, лейкозина, концентрированная азотная кислота, концентрированная соляная кислота, пробирки, штативы для пробирок, пипетки, резиновые груши.

ХОД ОПЫТА

Наливают в одну пробирку 0,5 мл концентрированной азотной кислоты, а в другую - 0,7 мл концентрированной соляной кислоты. Наклоняя каждую пробирку, осторожно вливают в нее по стенке 1 мл раствора белка так, чтобы он не смешивался с более тяжелым слоем кислоты, затем ставят пробирку в штатив. На гра­нице раздела двух жидкостей сразу или постепенно появляется белое кольцо осадка белка. При встряхивании количество осадка, выпавшего при действии азотной кислоты, заметно увеличивается, а осадок, выпавший при действии соляной кислоты, растворяется в ее избытке.

ОБЪЯСНЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПЫТА

Концентрированные минеральные кислоты образуют с белками солеобразные соединения за счет аминогрупп белковой молекулы и одновременно вызы­вают необратимые изменения (денатурацию) белка и выделение осадка. В большинстве случаев этот осадок растворим в избытке кислоты (за исклю­чением осадка, выпадающего при действии азотной кислоты).

Из фосфорных кислот лишь метафосфорная кислота НРО₃ осаждает белок в описанных условиях, даже в разбавленных растворах; этим путем можно об­наруживать наличие метафосфорной кислоты в присутствии других фосфорных, кислот — ортофосфорной Н₃РО₄ и пирофосфорной Н₄Р₂О₇.

Из сильных органических кислот для осаждения белков часто применяют трихлоруксусную и 5-сульфосалициловую кислоты.