Теоретическая справка

I. Культивирование вирусов.

Для культивирования вирусов используют:

1. куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью получения вирусов и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептичных условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в аллантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорион - аллантоис отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорион-аллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагии.

2. культуру клеток (тканей). Клетки получают из тканей животных и человека. Их делят:

- на первичные, которые используют в течение одной генерации. Первичные клетки получают из эпителиальной или соединительной ткани. Они растут в суспензии, при оседании прочно прикрепляются к стенке флакона или пробирки в виде монослоя.

- полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей или года. Они относятся к соматическим диплоидным клеткам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения.

- перевиваемые, которые длительное время размножаться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из нормальных, чаще эмбриональных линий клеток (клетки амниона человека, почек обезьяны) и злокачественных линий клеток (злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карценомы шейки матки, Hep - 3 -из лимфоидной карценомы).

Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатическим действием (ЦПД); которое проявляется изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида вируса

3. лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и т.д.). Их используют для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделение вирусов. Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями болезни или гибелью животного

Самостоятельная работа. Используя таблицы, теоретическую справку изучить биологические модели культивирования вирусов, зарисовать, сделать вывод.

1. Культуры клеток

первичные полуперевариваемые неперевариваемы

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Куриный эмбрион

1. Воздушное пространство

2. Отверстие в скорлупе

3. Скорлупная оболочка

4. Хорионаллантоисная оболочка

5. Желточный мешок

6. Белок

7. Амнион

8. Плод

9. Аллантоисная полость

Способы заражения:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

4.___________________________________________________________________________

5.___________________________________________________________________________

6.___________________________________________________________________________

Внимание! Заражение эмбриона происходит в асептических условиях, а вируссодержащий материал должен быть освобожден от бактерий путем добавления антибиотиков.

3. Лабораторное животное