Протокол исследования чистой культуры бактерий

5. Произвести определение чувствительности бактерий к антибиотикам двумя методами.

Метод дисков

На поверхность агара в чашке Петри вылить 1 мл взвеси бактерий и распределить её по поверхности, остаток культуры убрать пипеткой. После высыхания поверхности чашки на её сектора нанести пинцетом диски с антибиотиками. Выдержать чашки в течение 30 минут, после чего поместить в термостат.

Метод разведений

Взять два ряда пробирок: 1 – 7 пробирок по 1 мл физиологического раствора; 2 – 8 пробирок по 2 мл бульона. В первую пробирку первого ряда внести 1 мл пенициллина, содержащий 160 единиц. Содержимое пробирки перемешать и 1 мл перенести во вторую пробирку, из второй пробирки 1 мл перенести в третью и т. д. Таким образом, в пробирках будет 80, 40, 20, 10, 5 единиц и т. д. пенициллина в 1 мл.

В каждую пробирку второго ряда (кроме восьмой) внести по 0,2 мл разведения пенициллина из соответствующей пробирки первого ряда. Получаем разведения пенициллина – 8, 4, 2, 1 и т. д. в 1 мл бульона. В каждую пробирку засеять одну петлю суточной бульонной культуры испытуемого микроба.

Результат учитывается через сутки пребывания пробирок в термостате. Отметить наименьшую концентрацию антибиотика (наибольшее его разведение), при которой отсутствует рост микроба (бактерицидная концентрация), а также ту концентрацию при которой лишь наблюдается задержка роста культуры (бактериостатическая концентрация) по сравнению с контрольной восьмой пробиркой.

Контрольные вопросы

1. Какое действие оказывают физические и химические факторы на микроорганизмы?

2. Как подразделяются микробы по отношению к температуре?

3. Как проявляются антагонистические свойства микроорганизмов?

4. По каким признакам классифицируют антибиотики?

5. Каков механизм действия антибиотиков?

6. Какими методами определяется чувствительность бактерий к антибиотикам?

7. Какова методика тестирования ФП реакции и с метилрот?

8. В чём состоит сущность опыта Бухнера?