Работа 19. Осаждение белка концентрированными минеральными кислотами
Работа 18. Осаждение белка органическими растворителями.
Белки нерастворимы во многих органических растворителях. Однако их осаждение происходит только из нейтральных и слабокислых растворов и особенно полно в присутствии электролитов (ионные соли связываются коллоидными частицами и снимают заряд). Органические растворители дегидратируют частицы белка (разрушают водную оболочку) и этим понижают их устойчивость в растворе. Кратковременное воздействие органических растворителей сохраняет белок в естественном состоянии, продолжительное воздействие приводит к денатурации.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: спирт или ацетон, насыщенный раствор NaCl.
Оборудование: пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В пробирку наливают 5 капель раствора яичного белка и 20 капель спирта или ацетона, раствор мутнеет. При добавлении нескольких капель насыщенного раствора NaCl выпадает осадок белка.
|
|
Осаждение белка концентрированными кислотами происходит вследствие дегидратации белковых частиц и нейтрализацией их зарядов, а также рядом других причин (денатурация, образование солей и др.). В избытке серной и соляной кислот, а также при их длительном воздействии выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азотной кислоты растворения не происходит.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: концентрированные HCl, H2SO4, HNO3.
Оборудование: пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В 3 пробирки наливают по 15-20 капель концентрированной соляной, серной и азотной кислот. Затем осторожно, чтобы жидкости не смешивались, наслаивают равный объем белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкой пленки. Осторожно встряхивая пробирки, обнаруживают растворение осадка белка в случае осаждения соляной и серной кислотами, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется.
Белки из растворов могут осаждаться органическими кислотами, однако различные органические кислоты неодинаково действуют на белок. Механизм осаждения белков органическими кислотами объясняется дегидратацией белковой молекулы и снятием заряда.
Исследуемый материал: раствор яичного белка.
Реактивы: 10%-ный раствор СС13СООН, 20%-ный раствор С6Н3(ОН)(СООН)SО3Н.
Оборудование: пробирки, капельницы.
ХОД РАБОТЫ. В две пробирки наливают по 5 капель раствора белка, затем в одну пробирку добавляют 1-2 капли раствора ТХУ, в другую – столько же раствора сульфосалициловой кислоты. В пробирках образуется осадок.