Метод пропорций на плотных средах

Интерпретация результатов

Метод абсолютных концентраций (метод разведений на плотной или жидкой питательных средах)

Методы определения лекарственной чувствительности

Лекарственная устойчивость

Штамм МБТ принято считать устойчивым или резистентным, если он проявляет более низкую чувствительность к лекарству, по сравнению с «дикими» штаммами, которые никогда не были в контакте с данным препаратом. «Дикие» штаммы – это лекарственно чувствительные культуры МБТ, имеющие не менее 1% устойчивых к препаратам микроорганизмов. В любом «диком» штамме всегда содержится 10^-7 – 10^-11 спонтаннорезистентных к лекарствам особей.

Лекарственная резистентность: одно из проявлений изменчивости микобактерий – появление лекарственно резистентных мутантов.

Первичная и приобретённая

· Первичная – у нелеченных больных

· Приобретённая – в результате неадекватного лечения происходит рост числа мутантов, устойчивых к противотуберкулёзным препаратам.

Фенотипические:

· Культуральные – при задержке роста на плотных или жидких средах в присутствии антибактериального препарата;

· Молекулярные – без культивирования, например, по маркёрам изменений в метаболизме бактерий;

Генотипические:

· Выявление специфических для каждого антибактериального препарата генных мутаций после амплификации (ПЦР) соответствующего участка ДНК.

Культуральное определение чувствительности М. tuberculosis к противотуберкулёзным препаратам

· Классические методы, такие как метод абсолютных концетраций или метод пропорций, выполняются на плотных средах, содержащих противотуберкулёзные препараты.

· Системы бульонного культивирования ВАСТЕС 460, ВВL MGIT, ВАСТЕС 960, МВ /ВасТ - препараты растворяются в бульоне.

Цель исследования ЛЧ состоит в том, чтобы определить отличается ли клинический изолят от «дикого» штамма МБТ по степени чувствительности к соответствующему антимикробному агенту:

· При оценке результата микробиологического исследования культура МБТ признаётся устойчивой, если микобактерии дают рост на питательной среде в присутствии критической концентрации заключённого в неё противотуберкулёзного препарата.

· Критическая концентрация – это самая низкая концентрация, которая подавляет рост 95% «диких» штаммов МБТ.

· Для каждой среды или системы культивирования подобраны соответствующие критические концентрации препаратов.

Набор пробирок:

· С питательной средой, модифицированной противотуберкулёзными препаратами разных концентраций;

· Контрольной пробирки без препарата;

· Пробирки, содержащей препарат для выявления роста нетуберкулёзных микобактерий.

· Чувствительная культура – при наличии < 20 колоний (при том, что имеется обильный рост на контрольной пробирке без препаратов)

· Устойчивая культура – при наличии > 20 колоний

Принцип: выявление процента бактерий, устойчивых к критической концентрации лекарственного препарата

Метод: сравнение числа колоний, выросших в присутствии лекарственного препарата, с числом колоний в контроле

Критерий оценки: устойчивость – более 1% по сравнению с числом колоний в контроле

Два подхода:

1. Непрямой метод: заражение чистой культурой

2. Прямой метод: заражение мокротой (БК+)

Непрямой тест

· Выполняется с бактериальной суспензией, приготовленной из первично изолированной культуры

· Преимуществом непрямого метода является возможность точно калибровать культуру, используя оптический стандарт мутности, поскольку результаты прямого метода в некоторых случаях не могут быть оценены из-за избыточного или из-за неудовлетворительного роста на контрольной среде без препарата.

Прямой тест

· Предусматривает инокуляцию бактериоскопически положительного материала непосредственно в среду, содержащую противотуберкулёзный препарат

· Преимущество: сокращение времени диагностики

· Недостаток: микробная контаминация, которая более часто наблюдается и может исказить оценку результатов.