Современные методы исследования в гистологии

Предмет гистология. Методы гистологических исследований. Клеточная теория.

ВВЕДЕНИЕ В ГИСТОЛОГИЮ. СТРОЕНИЕ КЛЕТКИ.

Лекция 1

Гистология – это наука о строении, развитии и жизнедеятельности тканей материи. Ткани изучают в живом и неживом состоянии. Изучение гистологических объектов, их тончайшей структуры проводят при помощи микроскопов, которые увеличивают невидимые простым глазом детали строения в несколько сотен тысяч раз.

Курс гистологии условно разделен на следующие разделы:

1. Цитология - наука о клетке.

2. Эмбриология - наука о развитии, от зарождения до полного формирования организма.

3. Общая гистология - наука об общих закономерностях, присущих тканям.

4. Частная гистология – наука о строении, развитии органов и систем.

Главной задачей гистологии как предмета является получение знаний о микроскопическом и ультрамикроскопическом строении клеток, тканей органов и систем здорового организма, в неразрывной связи с их развитием и выполняемыми функциями.

Основными методами гистологических исследований являются микроскопирование и специальные (немикроскопические) методы (гистохимия, цитофотометрия, авторадиография и др.).

Объектами исследования могут быть живые или мертвые (фиксированные) клетки и ткани.

Для изучения клеток и тканей под микроскопом изготавливают гистологические препараты.

Основными методами исследования гистологических объектов яв­ляются световая и электронная микроскопия, которые широко исполь­зуются в клинической и экспериментальной практике.

Светооптические микроскопы. Основная оптическая часть микроскопа состоит из объектива и окуляра. Объектив является наиболее ответственной оптической системой, дающей увеличенное изображение предмета. Окуляр — оптическая система, которая служит в качестве лупы при визуальном на­блюдении увеличенного изображения предмета, даваемого объективом. Окуляр обычно увеличивает изображение в 5—25 раз.

Так же важнейшими характеристиками микроскопа являются раз­решающая способность и увеличение. Разрешающая способность — минимальное расстояние между двумя точками объекта, которые видны раздельно. Увеличение микроскопа— величина, показывающая, во сколько раз линейные размеры изображения, формируемого оптической системой микроскопа, больше линейных размеров объекта. Увеличение микроскопа зависит от увеличений объектива и окуляра и численно рав­но произведению этих увеличений. Современные оптические микроскопы имеют предел полезного увеличения до 1500 раз.

Электронная микроскопия. Электронные микроскопы обладают вы­сокой разрешающей способностью. Другими словами, в электронном микроскопе теоретически возможно повышение разрешающей способ­ности и соответственно увеличение изображения в 150000 раз больше по сравнению со световым микроскопом. Наиболее часто в морфологиче­ских исследованиях используются просвечивающие электронные мик­роскопы, позволяющие получить плоскостное изображение изучаемого объекта. В последние годы активно применяются растровые (сканирую­щие) электронные микроскопы, способные создавать трехмерные изоб­ражение, т. е. получать пространственное изображение структур.

Методы количественного исследования микроструктур в гистологиче­ских и цитологических препаратах. Количественная оценка микрострук­тур является необходимым условием получения объективных данных об их состоянии в норме, при экспериментальных воздействиях и в па­тологии. Основными количественными показателями микроструктур являются морфометрические (число структур и их геометрические пара­метры) и денситометрические, отражающие концентрацию (оптическую плотность) химических веществ в микроструктурах. Для выявления этих параметров применяют морфометрические и спектрофотометрические методы, а также автоматизированные системы обработки изображений.

Изучение организма на тканевом и клеточном уровнях требует при­готовления гистологических препаратов и их рассмотрения под микро­скопом. Цель приготовления гистологического препарата заключается в том, чтобы путем обработки привести исследуемый материал в удобное для изучения под микроскопом состояние, сделать его прозрачным и контрастным.

Часто изучение материала в свежем виде является наиболее целе­сообразным (например, наблюдение за работой ресничек мерцательно­го эпителия). Для приготовления препарата берется чистое предметное стекло. На его середину помещается капля воды или физиологического раствора, в которую погружают кусочки ткани, подлежащей рассмотре­нию, и под контролем микроскопа расправляют их препаровальными иглами.

Чтобы сделать препарат контрастнее и получить возможность хоро­шо различать отдельные его детали, объект подвергают окрашиванию. При этом пользуются тем, что разные структуры тканей и клеток по-раз­ному реагируют на тот или иной краситель.

Изготовление постоянных препаратов требует довольно большой затраты труден времени, такие препараты можно использовать в течение многих лет. Препараты готовят из небольших целых объектов (тоталь­ные препараты) или срезов; При всех условиях объект или срез должен быть тонким и прозрачным, иначе невозможно его изучение под микро­скопом.

Изготовление препарата состоит из нескольких этапов.