Этапы приготовления мазков-препаратов

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

К ЛАБОРАТОРНЫМ ЗАНЯТИЯМ

ПО ОБЩЕЙ МИРОБИОЛОГИИ

С ОСНОВАМИ ОБЩЕЙ И ЧАСТНОЙ ВИРУСОЛОГИИ

САРАНСК

2003

УДК

 

Составители: Л.В. Новикова, И.П. Куторкина, И.С. Романова.

 

 

Методические указания к лабораторным занятиям по общей микробиологии с основами общей и частной вирусологии. // Сост.: Л.В.Новикова, И.П.Куторкина, И.С.Романова. – Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2003. –  64 с.

 

 

       Методические указания написаны в соответствии с программой по микробиологии с вирусологией. Содержат планы занятий, задания для выполнения лабораторной работы, вопросы для самостоятельной подготовки к занятиям, основные методы изучения микроорганизмов и вирусов, дополнительный материал.

       Предназначены для студентов III курса дневного отделения биологического факультета специальности «Биоэкология».

 

Печатается по решению научно-методического совета Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева. 

 

ЗАНЯТИЕ 1

Тема: МИКРОБИОЛОГИЯ И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ БИОЭКОЛОГИИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ.

Цель занятия: ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, с методами изучения микроорганизмов, освоить технику иммерсионной микроскопии; освоить технику приготовления и простых методов окраски мазков-препаратов.

План занятия.

1. Распространение микробов в окружающей среде. Роль микробов в живой и неживой природе.

2. Микробиологическая лаборатория. Оборудование, правила работы, организация рабочего места.

3. Методы изучения микроорганизмов (микроскопический, бактериологический, экспериментальный, серологический, кожно-аллергический).

4. Микроскопический метод исследования. Виды современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия.

5. Тинкториальные свойства бактерий. Этапы приготовления мазков-препаратов. Простые методы окраски.

6. Морфология бактерий. Измерение размеров микробных клеток.

 

Задания для выполнения лабораторной работы.

1. Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории.

Выполняя микробиологические исследования, необходимо соблюдать следующие правила:

- в лаборатории должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску из марли. Работа с особо опасными микробами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях;

- с инфицированным материалом работают только с помощью инструментов (бактериологические петли, пинцеты, корцанги и др.);

- прикасаться руками к исследуемому материалу запрещается;

- при посеве материала делают надпись на пробирках и чашках Петри и пр.;

- материал высевают в пробирки и чашки Петри вблизи от пламени горелки с обжиганием бактериологической петли и краев пробирки;

- растворы, содержащие патогенные микроорганизмы, забирают пипеткой с помощью резинового баллона;

- в лаборатории запрещается курить и принимать пищу;

- рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи следует хранить в специально отведенном месте;

В ходе работы и по ее окончании применяются следующие способы дезинфекции:

- при случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором;

- руки обрабатывают дезинфицирующим раствором, а затем моют с мылом;

- помещение дезинфицируют с помощью бактерицидных ламп и путем обработки поверхности лабораторной мебели дезинфицирующим раствором.

2. Ознакомиться с оборудованием микробиологической лаборатории.

Лаборатории снабжены рядом обязательных приборов и аппаратов:

1. Приборы для микроскопии: биологический иммерсионный микроскоп с дополнительными приспособлениями (осветитель, фазово-контрастное устройство, темнопольный конденсор и др.), люминесцентный микроскоп.
2. Термостаты и холодильники.
3. Приборы для приготовления питательных сред, растворов и т.д.: аппарат для получения дистиллированной воды (дистиллятор), технические и аналитические весы, рН-метры, аппаратура для фильтрования, водяные бани, центрифуги.
4. Набор инструментов для манипуляций с микробами: бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.
5. Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др., аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок.
6. Аппаратура для стерилизации: автоклавы, сухожаровые шкафы, бактерицидные лампы.

Каждое рабочее место снабжается спиртовкой и сосудом с дезинфицирующим раствором. 

3. Приготовить мазок с агаровой культуры стафилококка, окрасить метиленовой синей, изучить под микроскопом.

Этапы приготовления мазков-препаратов.

Приготовление состоит из нескольких последовательных операций: подготовка мазка, высушивание, фиксация и окраска. Исследуемый материал наносят на чистое обезжиренное предметное стекло. Для взятия бактериальной культуры:

- нагревают до покраснения бактериальную петлю в пламени горелки;

- берут пробирку с исследуемой культурой в левую руку так, чтобы видеть поверхность среды; вращательным движением вынимают пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцами правой руки к ладони;

- обжигают край пробирки, осторожно вводят петлю и берут исследуемый материал;

- вынимают петлю, обжигают край пробирки и закрывают пробкой.

- взятый материал осторожно распределяют по предметному стеклу тонким слоем, после чего бактериальную петлю стерилизуют в пламени спиртовки;

- если препарат готовят из бактериальной культуры, выращенной на плотной среде, то на предметное стекло предварительно наносят каплю стерильного физиологического раствора

- мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре или в токе теплого воздуха, держа предметное стекло высоко над пламенем горелки. Нельзя допускать закипания материала, т.к. при этом может нарушиться структура микроорганизмов.

- фиксация препарата: высушенные мазки подвергают термической (предметное стекло (мазком вверх) проводят несколько раз через пламя горелки) или химической (фиксирующие растворы: формалин, спирты, глутаральдегид, жидкость Карнау, ацетон, пары осмиевой кислоты) обработке, в результате которой бактерии погибают и плотно прикрепляются к поверхности стекла.