Методы окраски препаратов

    Существуют простые и сложные методы окраски. При окраске простым методом используется только один краситель – водный фуксин (окрашивание производят 1-2 мин)

и метиленовый синий (окрашивание производят 3-5 мин). После истечения времени окрашивания препарат промывают дистиллированной водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем мазки высушивают на воздухе, при комнатной температуре, или осторожно промокая фильтровальной бумагой. 

4. Приготовить мазок бульонной культуры кишечной палочки, окрасить водным раствором фуксина, изучить под микроскопом.

       Ведущим методом исследования в микробиологической лаборатории является микроскопический метод. Для микроскопического исследования применяют биологические микроскопы отечественных моделей: «Биолам – р 11», «Биолам – р 15», «Биолам – 17» и др. Также используют еще несколько типов микроскопов: люминесцентный, электронный (просвечивающий электронный микроскоп, сканирующий электронный микроскоп) и специальные методы микроскопии: иммерсионная световая, фазово-контрастная, аноптральная (амплитудноконтрастная, фазовотемнопольная), интерференционная, поляризационная, темнопольная люминисцентная, метод сколов (замораживание – скалывание), иммунофлуоресцентные методы.

5. Освоить технику иммерсионной микроскопии.

- на приготовленный и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить препарат на предметный столик;

- установить иммерсионный объектив х 90 в рабочее положение, осторожно опустить тубус микроскопа вниз до погружения фронтальной линзы иммерсионного объектива в каплю масла.

- установить ориентировочный фокус при помощи макровинта. Окончательную фокусировку произвести микровинтом.

6. Изучить под микроскопом демонстрационные препараты.

   

Вопросы для обсуждения.

1. Предмет микробиология, основные понятия. 2. Роль микробов в живой и неживой природе. 3. Правила работы в микробиологической лаборатории. 4. Оборудование и организация работы микробиологической лаборатории. 5. Методы изучения микроорганизмов: микроскопический, бактериологический, экспериментальный, серологический, кожно-аллергический. 6. Виды современных микроскопов. 7. Правила работы с микроскопом. 8. Изучение микроорганизмов микроскопическим методом. 9. Изучение микробов методом иммерсионной микроскопии. 10. Тинкториальные свойства микроорганизмов. 11. Техника приготовления мазков-препаратов. 12. Простые методы окраски микроорганизмов. 13. Морфология бактерий. 14. Измерение размеров микробной клетки с помощью окуляр-микрометра и объект-микрометра.

 

Оформление лабораторной тетради.

         Записать правила работы в микробиологической лаборатории; зарисовать самостоятельно приготовленные и демонстрационные микропрепараты с различной морфологией микробов.

 

Дополнительный материал.

 

Рис. 1. Принципиальная схема светового микроскопа

ЗАНЯТИЕ 2

Тема: СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ.

Цель занятия: изучить структурные особенности прокариотических микроорганизмов, овладеть сложными методами окраски для выявления структурных компонентов бактериальной клетки.

План занятий.

1. Ультраструктура бактериальной клетки. Постоянные структурные элементы (нуклеоид, цитоплазма, цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка, мезосомы, рибосомы), их строение и функции.

2. Особенности строения клеточной стенки микробов. Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Окраска по Граму, механизм, значение для классификации бактерий.

3. Отличительные признаки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Протопласты и сферопласты.

4. Непостоянные структурные элементы бактериальной клетки (капсула, споры, жгутики, включения, ворсинки). Методы их выявления.

5. Исследование микробов в живом состоянии. Характеристика методов «висячей» и «раздавленной» капли.