Качественное определение

Аскорбиновая кислота. Качественное обнаружение аскорбино­вой кислоты основано на ее высокой восстановительной способно­сти.

1. При действии на аскорбиновую кислоту раствором нитрата серебра происходит восстановление серебра, при этом аскорбино­вая кислота окисляется в кетоформу:

 

                

 

              

 

 

2. При действии на аскорбиновую кислоту реактивом Феллинга медь восстанавливается до гемиоксида меди красного цвета:

 

3. При действии раствором перманганата калия раствор обесцвечивается вследствие восстановления марганца до Mn²⁺:

 

 

4. При взаимодействии аскорбиновой кислоты с феррицианидом калия в присутствии разведенной соляной кислоты и с последую­щим добавлением раствора трихлорида железа образуется берлин­ская лазурь, окрашивающая раствор в синий цвет:

 

3H₄[Fe(CN)₆] + 4FeCl₃→ 12HCl + Fe[Fe(Fe(CN)₆]₃

 

берлинская лазурь

 

5. Аскорбиновая кислота с солью железа (II) образует аскорбинат железа фиолетового цвета:

 

 

H₂O

                                                                                                                                                             

 

 

6. Иод обесцвечивается от действия аскорбиновой кислоты:

 

 

Перечисленные выше реакции можно провести с выделенной из сырья и очищенной от сопутствующих веществ субстанцией ас­корбиновой кислоты.

В сырье аскорбиновую кислоту в основном определяют методом тонкослойной хроматографии после экстракции водой. В качестве сорбента используют силикагель G, полиамид, оксид алюминия, пластинки «Силуфол». Подвижной фазой чаще всего является сис­тема растворителей: ледяная уксусная кислота-ацетон-метанол-бензол(5:5:20:70) или (3:3:10:24); хлороформ - этилацетат (1:1); этилацетат - ледяная уксусная кислота (80:20); этанол - гексан (1:3).

После хроматографирования пластинку высушивают и для об­наружения аскорбиновой кислоты обрабатывают следующими реактивами: раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия (ас­корбиновая кислота проявляется в виде белых пятен на розовом фоне), щелочным раствором нитрата серебра (проявляется в виде темно-серых пятен), этанольным раствором фосфорномолибденовой кислоты (проявляется в виде темно-синих пятен на желто-зеленом фоне).

Каротиноиды. Для качественного обнаружения каротиноидов на хроматограмме используют их свойства образовывать с кисло­тами продукты разного цвета. Для этого применяют соляную, сер­ную, фосфорную, азотную, муравьиную и трихлоруксусную кисло­ты. β-каротин с концентрированной азотной кислотой окрашива­ется в синий цвет, переходящий в зеленый, потом в желтый; β-ка­ротин с концентрированной серной кислотой дает синюю окраску; с раствором хлорида сурьмы (III) в хлороформе (реакция Карра-Прайса) образуются продукты синего цвета. В сырье каротиноиды можно определить при помощи бумажной и тонкослойной хроматографии. Для этого проводят многократную экстракцию каротиноидов из сырья неполярными растворителями, такими как ацетон, спирт, петролейный эфир, или смесью этанол-ацетон (1:3).

Хроматографируют каротиноиды на бумаге в системе петролей­ный эфир-бензол (1:15). Для хроматографирования каротиноидов при помощи тонкослойной хроматографии используют следующие сорбенты: силикагель G; оксид алюминия; крахмал; оксиды каль­ция, магния; пластинки «Силуфол». В качестве системы раствори­телей применяют бензол-этиловый спирт (80:20), циклогексан-эфир (80:20), петролейный эфир-бензол-метанол (60:15:4), хлоро­форм-этиловый спирт (9:1). Пластинки, на которые нанесена смесь оксида магния и гидроксида кальция в бензоле, хроматографируют в системе бензол-н-гексан—этанол (40:20:1).

Для обработки хроматограмм часто применяют фосфорномолибденовую кислоту. В этом случае на желтом фоне каротиноиды проявляются в виде синих пятен при нагревании пластинки до 80 °С.

Витамин К₁. Наличие этого витамина в сырье в основном оп­ределяют методом тонкослойной хроматографии после экстракции хлороформом или этиловым спиртом. В качестве сорбентов ис­пользуют оксид алюминия, силикагель G, пластинки «Силуфол» в системах растворителей: бензол-хлороформ (1:1) бензол-ацетон (9:1), бензол-петролейный эфир (1:1), гексан-эфир (8:2).

В УФ-свете на хроматографической пластинке витамин K₁ про­является в виде пятна с зелено-желтой флуоресценцией. Для обнаружения витамина K₁ на хроматографических пласти­нах применяют 95% серную кислоту, 60% хлорную кислоту и 65% азотную кислоту. Витамин K₁ проявляется в виде бурых пятен. При обработке хроматограммы парами йода и после смачивания ее во­дой витамин К, проявляется в виде фиолетового пятна. После обра­ботки 0,25% раствором родамина В, витамин K₁ проявляется в УФ-свете в виде пятна фиолетового цвета.

Токоферолы в экстрактах определяют при помощи тонкослой­ной хроматографии на пластинках силикагель G в системе раство­рителей этилацетат-бензол (3:7), циклогексан-н-гексан-изопропиловый эфир-аммиак (20:20:10:1); петролейный эфир-бензол (1:1). Их обрабатывают раствором фосфорномолибденовой кислоты. При этом токоферолы образуют темно-синие пятна; с концентрированной азотной кислотой при нагревании хромато­граммы до 80 °С - токоферолы дают пятна красно-оранжевого цве­та.