Количественное определение

Методы количественного определения витаминов основаны на их физико-химических свойствах, таких как окислительно-восстановительные свойства, способность флуоресцировать в УФ-свете. Применяют различные методы определения: титрометрические, фотоколориметрические, спектрофотометрические, флуорометрические и др.

Аскорбиновую кислоту можно определять титрометрическим методом, который основан на восстановлении 2,6-дихлорфенолиндофенола. С этим же реактивом можно провести фотоколориметрическое определение аскорбиновой кислоты. Для этого проводят экстракцию сырья 2% метафосфорной кислотой, добавляют раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола. Через 35 сек. прово­дят фотоколориметрирование. Параллельно колориметрируют кон­трольный раствор 2%

метафосфорная кислота с 2,6-дихлорфенолиндофенолом. Интенсивность окраски пропорцио­нальна количеству аскорбиновой кислоты.

Количественное определение аскорбиновой кислоты можно провести фотоколориметрическим методом с помощью гексацианоферрита калия. В кислой среде аскорбиновая кислота восстанав­ливает гексацианоферрит калия до гексацианоферрата калия, кото­рый в присутствии ионов железа (Ш) образует берлинскую лазурь, с последующим ее фотоколориметрированием.

Каротиноиды определяют в лекарственном сырье фотоколори­метрическим методом, основанном на измерении интенсивности их природной окраски. Разработан спектрофотометрический метод определения каротиноидов. Каротиноиды из сырья экстрагируют петролейным эфиром, затем хроматографируют на пластинке «Си-луфол» в системе петролейный эфир-бензол-метанол (60:15:4), элюируют хлороформом и спектрофотометрируют при χ_max = 464 нм (α-каротин) при  χ_max = 456 нм (β-каротин).

Тиамин и рибофлавин количественно определяют методом, ос­нованным на способности флуоресцировать в ультрафиолетовом свете. Тиамин окисляется красной кровяной солью в щелочной среде, образуя тиохром, который имеет голубую флюоресценцию в УФ-свете, рибофлавин флюоресцирует желто-зеленым светом. Ве­личину флуоресценции измеряют на флюорометре. Разработан хроматоспектрофотометрический метод определения тиамина и рибофлавина. Сущность метода заключается в извлечении витами­нов из растительного сырья, хроматографии в тонком слое силикагеля, элюировании витаминов с пластинки и количественном опре­делении на спектрофотометре.

Токоферол количественно определяют хроматоспектрофотометрическим методом, основанным на окислительно-восстановительных свойствах токоферола, который под действием иода окисляется в хинон.

Метод количественного определения аскорбиновой кислоты (по ГФ XI изд., вып. 2, стр. 294) основан на способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол:

аскорбиновая кислота             2,6-дихлорфенолиндофенол

 дегидроаскорбиновая кислота 2,6-дихлорфенолиндофенол

                                                     (восстановленная форма)

2,6-дихлорфенолиндофенол в щелочной среде имеет синюю окраску, в кислой - красную, а при восстановлении обесцвечивается:

                 синий                                              красный

                                     бесцветный

Метод количественного определения каротиноидов основан на экстракции сырья (плоды облепихи) бензином или петролейным эфиром до отсутствия окраски в последнем извлечении, упарива­нии полученных экстрактов до небольшого объема и определении оптической плотности полученного раствора.