Стандартизация аллергенов

В настоящее время формируется общая всемирная стратегия стандартизации препаратов аллергенов, предусматривающая обязательную стандартизацию по следующим признакам:

- суммарной аллергенной активности;

- биологической активности;

- содержанию в препарате главных аллергенов в единице массы.

Суммарная аллергенная активность стандартизуется по степени вызываемой им кожной аллергической реакции (проба уколом - prick-тест) на чувствительных к данному аллергену пациентах, соотнесенной с кожной реакцией на гистамин.

Состав аллергенного препарата характеризуют с использованием иммунохимических методов (изоэлектрофокусирование, иммуноэлектрофорез, иммуноблоттинг, РАСТ, перекрестный радио-иммуно-электрофорез).

В мире широко распространены 2 системы стандартизации аллергенов:

- AU (Allergy Units -аллергенные единицы), разработанная в США и основанная на кожной реакции пациента in vivo, выраженная суммарным диаметром эритемы в мм на внутрикожное титрование аллергеном;

- BU (Biological Units - биологические единицы), разработанная и применяемая в Европе, позволяющая измерять дозу аллергена в биоэквивалентных единицах, которые рассчитываются по кожной реакции при prick-тестировании. 1000BU/мл эквивалентны кожной реакции пациента на раствор гистамина в дозе 10 мг/мл.

Выпускаемые в настоящее время отечественные препараты аллергенов стандартизуют по содержанию в препарате единиц белкового азота (PNU), а их аллергенную активность устанавливают по результатам кожного тестирования на чувствительных к этому аллергену пациентах.

Новые технологии клонирования молекул уже сейчас позволяют получать многие важные аллергены (аллергены пыльцы растений, постельного клеща, эпидермиса некоторых животных, насекомых и др.) в виде рекомбинантных белков, имеющих аллергенную активность, сравнимую с соответствующими природными белковыми аллергенами. Такая технология позволяет строго количественно определять главные аллергены в производственных сериях лекарственных форм.

Лечебные аллергены

Для лечения аллергических заболеваний с помощью аллергенспецифической иммунотерапии (АСИТ) используют водно-солевые экстракты аллергенов, а также депонированные и модифицированные формы лечебных аллергенов. Депонированные и модифицированные лечебные аллергены обладают меньшей аллергенностью и большей иммуногенностью, что проявляется высокой эффективностью при меньшем количестве побочных эффектов. В клинической практике широко применяют аллергоиды (полученные путем полимеризации аллергена формальдегидом), депонированные аллергены (аллергены в форме суспензии, адсорбированные на гидроокиси аллюминия и химически модифицированные с помощью глутарового альдегида). В ГНЦ-Институте иммунологии МЗ РФ проведены работы по направленной модификации белков путем создания коньюгированных форм аллергенов с иммуномодулятором полиоксидонием, которые показали высокую клиническую эффективность и безопасность для АСИТ.

6. 7. Подходы к диагностике аллергических заболеваний

Для решения вопроса о том, является ли заболевание аллергическим, необходимо проведение медицинского обследования. Если клинические симптомы соответствуют аллергическим проявлениям, необходимо провести исследования для выявления конкретных аллергенов и специфических лабораторных изменений с целью постановки окончательного диагноза.

Аллергологический анамнез.

Аллергологический анамнез является наиболее универсальным методом диагностики аллергии, правильного выбора тестирования, дифференциации с неаллергическими заболеваниями и назначения эффективной терапии.

Основные разделы аллергоанамнеза:

1. Основные жалобы по органам и системам.

2. Время и причины появления симптомов заболевания, характеристика выраженности (приступообразно, медленно и т.п.), частоте и продолжительности симптомов.

3. Динамика симптомов по дням, месяцам, годам, сезонам, в разных помещениях, в командировках, на даче и т.п.

4. Наследственная предрасположенность (у родственников 1 и 2 степени, по каким заболеваниям и конкретно по наследованию аллергических заболеваний).

5. Реакции на распространенные аллергены (пищевые продукты, лекарственные средства, домашнюю пыль, плесневые грибы, скошенную траву, домашних животных, насекомых), загрязняющие и раздражающие вещества (дым, смог, пахучие вещества), холод, резкое изменение погоды.

6. Изучение бытовых особенностей проживания (дом деревянный, панельный, система отопления, контакт с домашними животными одеяла, подушки, ковры).

7. Выявление факторов, предрасполагающих к аллергии (частые ОРВИ, паразитозы, заболевания желудочно-кишечного тракта, реакции на профилактические прививки, повреждения ЦНС, укусы насекомых, изменения места жительства, сезона года, метеоусловия).

8. Профессия, увлечения. Контакт с органической пылью, пластмассами, резиной, строительными материалами, инсектицидами, химикатами.

9. Предшествующие ранее аллергические проявления. Прием антигистаминных средств, эффективность лечения эпизодов аллергии.

10. Перенесенные заболевания

11. Применение лекарственных средств (антибиотики, анестетики и т.п.)

12. Реакции на физические, эмоциональные нагрузки

13. Курение

14. Проводившееся ранее лабораторное обследование, его результаты

Физикальные исследования:

- исследование кожных покровов;

- осмотр глаз – оценивают гиперемию: коньюктивы, склер, слезотечение, отделяемое из глаз;

- осмотр носа, наличие поперечной складки у детей (аллергический ринит), риноскопия (состояние слизистой носовых раковин и носовой перегородки, количество и характер отделяемого, полипы, инородные тела, проходимость носовых ходов);

- осмотр ротоглотки: при аллергических процессах заднебоковые поверхности глотки и язычок гиперемированы и отечны;

- исследование грудной клетки: осмотр, пальпация, перкуссия, аускультация: при экзогенной (атопической) бронхиальной астме в межприступный период рентгенологические и спирометрические изменения обычно отсутствуют; бочкообразная грудная клетка характерна для бронхиальной астмы, хронического обструктивного бронхита, экзогенного аллергического альвеолита, симптом барабанных палочек - для брохоэктазов.

Лабораторные исследования in vitro

1. Общий анализ крови. При атопиях количество лейкоцитов, нейтрофилов в норме, показатели СОЭ в норме. Как правило, повышено количество эозинофилов (5-15%).

2. Цитология мокроты, отделяемого из носа – при обострении атопического процесса – преобладают эозинофилы.

3. Общий уровень Ig E в сыворотке крови повышен (исключение - гельминтозы).

4. Измерение уровня аллергенспецифических IgE: при атопии повышены – патогномоничный признак атопий. 

Диагностические исследования in vivo

Кожные пробы.

Выделяют накожные (скарификационные), тесты уколом (прик-тесты), апликационные и внутрикожные варианты введения аллергенов.

а) Скарификационные аллергопробы – аллерген наносится на место скарификационной царапины, сделанной на коже предплечья. Оценивается через 20-30 минут «эритема и волдырь» в месте введения аллергена. Контрольные пробы осуществляются с помощью нанесения 0,1% гистамина (положительный контроль), тест-контрольной жидкости (отрицательный контроль)

б) Внутрикожные пробы проводятся при сомнительных результатах кожных проб. Для развития реакции требуется меньшая доза аллергена – 0,1 мл аллергена разведенного 1:100. Количество внутрикожных проб с аллргенами не должно превышать 4-5. Внутрикожные пробы с пищевыми аллергенами не проводятся. Оценивают пробы через 10-30 минут по таблицам соответствия «диаметр волдыря – количество крестов».

в) Провокационные пробы – метод выявления сенсибилизации, основанный на введении аллергена в орган-мишень. Проводят очень часто с пищевыми аллергенами.

· Основное преимущество - большая достоверность.

· Основные недостатки – за одно посещение можно провести только одну пробу, результат невозможно оценить количественно; сопряжены с высоким риском тяжелых аллергических реакций.

Противопоказаны: если в анамнезе указаны крапивница, отек Квинке, анафилактический шок 

г) Проба Праустница-Кюстнера - внутрикожное введение сыворотки больного с аллергией здоровому с последующим внутрикожным введением аллергена. В настоящее время не ставится в связи с опасностью внесения вирусов с сывороткой.

Препараты коммерческих аллергенов собраны в диагностические планшеты и разделены на группы: бытовые, эпидермальные, пыльцевые, пищевые, инсектные и т.п. Аллергены выпускают в концентрированном виде, хранят при температуре 2-8°С до 2-3х лет. В России производство аллергенов осуществляется в НИИ им. Мечникова (Москва), НИИ вакцин и сывороток (Ставрополь).

Результаты диагностических проб обязательно сопоставляют с данными анамнеза. Кожные пробы позволяют достаточно точно определить основные причинные аллергены. Но скарификационные пробы малоинформативны при диффузных дерматитах (в таких случаях выбор - за провокационными пробами).

При лекарственной аллергии кожные пробы проводятся только с белковыми препаратами (инсулин, сыворотки) и пенициллином. В основном лекарственная аллергия развивается на метаболиты лекарств, поэтому пробы малоинформативны.

 

Противопоказания для проведения диагностических проб in vivo:

- обострение основного заболевания и сопутствующих заболеваний;

- возраст до 2-х лет и после 60 лет;

- анафилактический шок в анамнезе;

- во время беременности;

- психические заболевания;

- пероральный прием антигистаминных, стероидных препаратов (не имеет смысла).  

 

Исследование функции внешнего дыхания применяется для дифференциальной диагностики аллергических и неаллергических заболеваний легких, оценки реактивности бронхов, тяжести этих заболеваний и эффективности лечения.

а) В начале лечения проводят спирометрию и пневматохометрию. Легочные объемы определяют до и после ингаляции бронходилататоров. 

б) Определяют нарушения газообмена, исследуют газы артериальной крови.

в) Тесты специфической бронхиальной проводимости с подозреваемым аллергеном (вариант провокационного теста). Необходима близость реанимации, набора специфических препаратов для оказания блокирующей приступ терапии

Противопоказания:

- серьезная соматическая патология (сердечно-сосудистая, дыхательная недостаточность);

- исходное снижение ФВД более 70% от нормы;

- исходно высокий уровень неспецифической гиперреактивности бронхов;

- плохой контакт между врачом и больным.    

Рентгенологические исследования грудной клетки проводят всем больным с аллергической патологией дыхательных путей. При бронхиальной астме в межприступный период изменений не обнаруживают, при длительном течении – усиление легочного рисунка и повышение прозрачности легочных полей. Рентгенография позволяет исключить пневмонию, ателектаз, пневмоторакс, которые могут осложнять приступ бронхиальной астмы. Для выявления бронхоэктазов раньше применяли томографию и бронхографию, в настоящее время используют компьютерную и магнито-резонансную диагностику.

Другие исследования

А) Анализ мочи.

Б) Биохимический анализ крови.  При атопиях обычно в норме.

В) Анализ кала - проводится для исключения паразитозов.

Г) При подозрении на ХОЗЛ определяют уровень и фенотип альфа1-антитрипсина.

Д) При подозрениях на иммунодефициты при заболеваниях легких проводят иммунологическое исследование.

Е) Для дифференцирования с муковисцидозом проводят исследования уровня хлора в поте.

 

Таким образом, в настоящее время клиническая иммунология и аллергология располагают широкими диагностическими возможностями выявления причинного аллергена и механизмов нарушений иммунного ответа. На основании этих данных возможно избирательное воздействие на разные составляющие аллергического процесса.

 

 

7. АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ РИНИТ.

 

Ринит – это воспаление слизистой оболочки полости носа, сопровождающееся чиханием, зудом, ринореей и заложенностью носа. 

Ринит является одним из самых распространенных заболеваний во всех возрастных группах. Многофакторная этиология и различные варианты ответа организма на воздействие болезнетворных факторов определяют многообразие клинических форм ринита, лечение которых требует дифференциального подхода.

7.1. Классификация ринитов.

1. Аллергический ринит:

· сезонный (интермитирующий, общее название «поллиноз»)

· круглогодичный (персистирующий)

2. Инфекционный ринит:

· острый

· хронический

3. Другие виды ринита, включающие:

· идиопатический

· профессиональный

· гормональный

· медикаментозный

· вызванный веществами раздражающего действия

· пищевой

· психогенный

· атрофический

Аллергический ринит объединяет сезонные и круглогодичные риниты, вызываемые причинно-значимыми аллергенами небактериальной природы.

Диагноз инфекционного ринита (вирусного или бактериального) в международной клинической практике основывается не на определении специфического микроорганизма, а учитывает характер отделяемого из полости носа (гнойное, негнойное), что обычно подтверждается микроскопией (нейтрофилия в носовом секрете).

  Диагноза «вазомоторный ринит» в международной классификации нет. Название «вазомоторный ринит» часто применяется для характеристики неаллергического, неинфекционного ринита. Это больше запутывает, чем объясняет проблему. Авторы международной классификации предлагают опустить термин «вазомоторный» ещё и потому, что сосудистая реакция имеет место при каждой форме ринита. Поэтому наиболее удачным с их точки зрения является термин «идиопатический ринит».

«Идиопатический ринит». У больных с этим видом ринита выявляется повышенная чувствительность к различным неспецифическим раздражителям – резким запахам (одеколон, отбеливатель, растворители), табачному дыму, пыли, выхлопным газам, изменениям температуры окружающей среды и влажности.

 

7.2. Эпидемиология и этиология ринитов.

   В последнее десятилетие повсеместно отмечается тенденция роста распространённости сезонного аллергического ринита (интермитирующая форма или поллиноз). По данным различных авторов поллиноз в настоящее время в структуре аллергических заболеваний занимает от 10 до 80%. В России в последние 10-15 лет заболеваемость в разных климатогеографических зонах составляет 1-15%. Среди взрослого населения Англии в возрасте от 16 до 65 лет ринит диагностирован у 16% (8%- круглогодичные формы, 6% круглогодичные и сезонные, 2% -сезонные). В США аллергический ринит наблюдается у 75% городского и 25% сельского населения. Следует отметить, что подлинная распространённость данного заболевания значительно больше, чем это определяется при анализе структуры обращаемости. Гиподиагностика аллергического ринита обусловлена как низкой обращаемостью больных к врачу по поводу данного заболевания, так и недостаточной подготовкой врачей по диагностике аллергических заболеваний.

Симптомы аллергического ринита значительно снижают качество жизни больных: нарушается профессиональная деятельность, социальная активность, нарушается сон, ухудшается эмоциональное благополучие.

Причинные факторы.

Круглогодичный ринит вызывают в основном бытовые и эпидермальные аллергены.

Сезонный аллергический ринит вызывает пыльца различных деревьев и трав в весенне-летний период года.

Факторы, способствующие возникновению аллергического ринита:

·  вирусные респираторные инфекции

·  сопутствующие атопические болезни

·   табакокурение

  К триггерным факторам также относятся:: холодный воздух, пыль, дым, краски, загрязнённый воздух, чернила, стиральные порошки, горячая острая пища, алкогольные напитки.

      7.3. Симптоматика аллергического ринита.

1. Зуд в носу, отличающийся от раздражения ноздрей (преддверия носа). Чихание.

2. Насморк в виде обильных выделений через ноздри или в виде отделяемого по задней стенке глотки. Важно дифференцировать характер отделяемого: непрозрачное, «молочного» характера (гнойное), водянистое (слизистое).

3. Затруднение носового дыхания, которое может быть двусторонним, односторонним или перемежающимся (т.е. закладывание носа).

4. Дыхание ртом (особенно ночью) и его последствия: боли в горле, храпение, нарушения сна, дневная слабость.

5. Носовой оттенок голоса.

6. Снижение обоняния.

7. Глазные симптомы – зуд и жжение (при сезонных ринитах).

8. Симптомы синусита.

7.4. Патогенез аллергического ринита.

Преобладающий механизм формирования аллергических ринитов - I тип аллергических реакций

1. Иммунологическая стадия. Впервые попавший аллерген вызывает формирование иммунного ответа по Тh2-пути. В результате активации этого пути нарабатываются антигенспецифические антитела класса IgЕ против данного аллергена. Фиксация IgЕ на поверхности тучной клетки осуществляется через специфический Fce-рецептор (CD23). Наряду с наработкой иммуноглобулинов формируется иммунологическая память. При повторном попадании аллергена через слизистые в определенном участке активируется синтез В-лимфоцитами специфических антител IgЕ, запускается иммунное воспаление, опосредованное Тh2, провоспалительными цитокинами (IL-4, IL-5, IL-6, IL-8) и хемотаксисом других клеток (тучные клетки, эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты).

2. Патохимическая стадия. На поверхности тучных клеток формируются иммунные комплексы из специфического IgЕ и аллергена. Тучные клетки активируются. Меняется мембранная проницаемость для ионов Са, изменяется соотношение цАМФ/цГМФ, энергетический потенциал, активируются фосфолипиды мембраны, запускаются метаболические и синтетические процессы. Внутри тучной клетки структурируются микрофиламенты и происходит дегрануляция – высвобождаются гранулы с биологичеси активными веществами (БАВ). Среди метаболитов тучных клеток выделяют медиаторы ранней фазы – высвобождаются через 20-30 минут (гистамин, серотонин, факторы хемотаксиса и др.) и медиаторы поздней фазы – нарабатываются через 6-12 часов (лейкотриены, простагландины, супероксид, PAF и др.). Медиаторы поздней фазы являются продуктами метаболизма арахидоновой кислоты мембран тучных клеток..

3. Патофизиологическая стадия. Опосредуется воздействием БАВ через специфические рецепторы на шоковые органы-мишени. Гистамин взаимодействует с Н-1, Н-2, Н-3 гистаминовыми рецепторами. Эффекты гистамина на окружающие ткани характеризуются классической триадой: спазм гладкой мускулатуры, гиперсекреция экзокринных желез, отеки.

 При длительном течении процесса постепенно происходит нарушение целостности слизистых барьеров. При хроническом аллергическом воспалении изменения могут стать необратимыми.

Медиаторы аллергических реакций 1 типа

Гистамин.

Цитокины - м онокины (GM-CSF; TNFa; IL-1; IL-5; IL-6; IL-8; IL-12; IL-15), лимфокины (Il-2; IL-4; IL-13; IFN g).

Метаболиты арахидоновой кислоты - лейкотриены: цистеиновые (LTC4; LTD4; LTE 4) и нецистеиновые (LTB 4).

  Продукты клеток воспаления - гранулярные белки: э озинофильные (катионный, пероксидаза, основной белок, белок Х - нейротоксин), триптаза тучных клеток.

 Молекулы адгезии: э ндотелиальная молекула адгезии - ЕLАM1, васкулярная молекула адгезии - VCAM1, межклеточная молекула адгезии - ICAM1.

 

СИМПТОМЫ АЛЛЕРГИЧЕСКОГО РИНИТА И ОСНОВНЫЕ МЕДИАТОРЫ

 

Клинические проявления	Патофизиологический механизм	Предполагаемые медиаторы
Зуд	Стимуляция чувствительных нервных окончаний	Гистамин (Н1), Простагландины
Заложенность носа	Отек слизистой	Гистамин, кинины, ЛТС4, ЛТД4, ЛТЕ4
Чихание	Стимуляция чувствительных нервных окончаний	Гистамин, ЛТС4, ЛТД4, ЛТЕ4
Ринорея	Стимуляция секреции слизи	Гистамин, прямое и опосредованное действие (через мускариновый эффект), ЛТС4, ЛТД4, ЛТЕ4
Неспецифическая гиперреактивность и поддержание заложенности носа	Поздняя фаза ответа Вазодилатация	Эйкозаноиды Хемотаксические факторы (нейтрофилов и эозинофилов)