2020-01-15
196
Лабораторная работа 1.
Стерилизация питательных сред.
Цель работы: ознакомиться с методами стерилизации питательных сред.
Материалы и оборудование: дрожжевая суспензия, камера Горяева, микроскоп, краситель, сухожаровой шкаф, чашка Петри со средой Сабуро, пипетки, предметные и покровные стёкла, мерные цилиндры и стаканы, конические колбы на 100 см3 и 50 см3, лабораторная плитка, ватно-марлевые пробки, дистиллированная вода, спирт.
Ход работы.
1. В дрожжевой суспензии проводится подсчёт клеток с помощью камеры Горяева;
2. приготовить среду Сабуро: сухое вещество 62 г размешать в 1 л дист. воды, прокипятить на плитке до полного расплавления (2-3 мин), профильтровать через ватно-марлевый фильтр. Налить в стерильную колбу на 50 см3, закупорив её ватно-марлевой пробкой;
3. В коническую колбу на 100см3 налить 50 мл дрожжевой суспензии, затем закупорить ватно-марлевой пробкой;
4. Поместить в сухожаровой шкаф при температуре 70 ºC на 30 мин;
5. Проверить суспензию на наличие живых клеток методом окрашивания метиленовой синью;
|
|
|
6. Среду Сабуро охлаждать до температуры 47,5 ºC в течение 15-20 мин. Затем разлить в стерильные чашки Петри.
7. Далее произвести посев дрожжевой суспензии в остывшую среду. Проверка наличия роста на среде производится через 48-72 часа.
8. Сделать вывод об эффективности стерилизации. По отсутствию живых клеток судят о правильности расчёта времени выдержки суспензии в заданных условиях.
Стерилизация питательных сред
Стерилизация - полное уничтожение вегетативных клеток микроорганизмов и их спор в каком – либо материале.
Автоклавирование. Питательные среды стерилизуют главным образом в автоклавах насыщенным паром под давлением 0,05-0,2 МПа. Температура насыщенного пара при различных давлениях показана ниже:
| Показатели манометра, МПа | Температура насыщенного пара, градусы Цельсия |
| 0 | 100 |
| 0,05 | 12 |
| 0,1 | 121 |
| 0,15 | 128 |
| 0,2 | 134 |
| 0,3 | 144 |
Стерилизация текучим паром (дробная стерилизация). Данный способ применяют для стерилизации питательных сред, изменяющих свой состав и свойства под действием температур выше 100 ºC. Сущность дробной стерилизации состоит в том, что нагревание среды (или ее компонентов) проводят при 100 ºC три раза по 30 мин трое суток подряд. Кратковременное прогревание среды кипячением уничтожает в основном термолабильные вегетативные клетки микроорганизмов. Поэтому между нагреваниями питательные среды выдерживают при комнатной температуре (или в термостате при 30 ºC) и дают возможность прорасти оставшимся жизнеспособным спорам. Образовавшиеся из термоустойчивых спор вегетативные клетки погибают при повторном кипячении. Продолжительность нагревания может быть увеличена до 45-60 мин, что зависит от объема жидкости.
|
|
|
Дробную стерилизацию питательных сред проводят в аппарате Коха или в автоклаве с закрытой, но не завинченной крышкой. Так как нагревание ведут в парах кипящей воды, способ называют стерилизацией текучим паром. Дробной стерилизации подвергают среды, в состав которых входят сахара, многоатомные спирты, желатин.
Стерилизация путем прерывистого нагревабыла предложена английским физиком Джоном Тиндалем и получила названиетиндализации. Среды необратимо изменяющиеся при кипячении, осторожно прогревают при более низкой температуре: при 60-80 ºC в течение 5 сут подряд по 30-60 мин или при 56-58 ºC на протяжении 6-7 сут, в первые сутки – 2 ч, в последующие – по 1 ч. Температурную обработку сред ведут на водяной бане или в ультратермостате, где температура автоматически поддерживается на определенном уровне с помощью специального устройства. В промежутках между нагревами среды выдерживают в обычном термостате при 30 ºC.
Пастеризация. Пастеризация, или неполная стерилизация, предложена Луи Пастером. Она предназначена для уничтожения в основном аспорогенных микроорганизмов однократным прогреванием при температуре 60-75 ºC и выдержке 15-30 мин или при 80 ºC в течение 10-15 мин. Пастеризации подвергаются продукты и среды, которые при воздействии боле высоких температур претерпевают глубокие изменения, теряют качество и питательную ценность. Пастеризацию широко применяют в пищевой промышленности.
Стерилизация фильтрованием. Стерилизацию жидких питательных сред, не выдерживающих даже незначительного нагревания, производят фильтрованием через специальные мелкопористые бактериальные фильтры. На бактериальных фильтрах задерживаются механические взвешенные примеси, в том числе и клетки микроорганизмов. Исключение составляют вирусы и фаги. Фильтрованию подвергают среды с белками, антибиотиками, витаминами, летучими веществами, а также культуральные жидкости с целью освобождения от клеток и сохранения всех продуктов метаболизма в неизменном виде. Фильтры изготавливают из положительно заряженных материалов.
Вывод: в ходе выполнения данной работы я ознакомился с методами стерилизации, повторил методический материал про методы стерилизации питательных сред. Также я установил, что каждый метод стерилизации имеет свои преимущества, но методы не являются универсальными. Для разных нужд, для разных экспериментов необходимо использовать разные методы стерилизации.
Лабораторная работа 3.
Механическое разрушение клеток.
Цель работы: ознакомиться с методами механического разрушения клеток.
Материалы и оборудование: дрожжевая суспензия, предметные стёлка, стеклянная палочка, водяная баня, кварцевый песок, микроскоп, дистиллированная вода, стаканы, цилиндры, фарфоровая ступка, метиленовый синий, лабораторная плитка.
Ход работы:
1. 10 мл дрожжевой суспензии заморозить в холодильной камере, затем разморозить. Затем окрасить суспензию в препарате «раздавленная капля» и рассмотреть под микроскопом.
2. 10 мл дрожжевой суспензии заморозить в холодильной камере. Затем растереть в ступке с кварцевым песком. Окрасить в препарате «раздавленная капля» и рассмотреть под микроскопом.
3. 1 каплю дрожжевой суспензии растереть на предметном стекле стеклянной палочкой в течение 5 минут. Окрасить в препарате «раздавленная капля» и рассмотреть под микроскопом.
4. 10 мл дрожжевой суспензии поставить на кипящую водяную баню на 30 минут. Окрасить в препарате «раздавленная капля» и рассмотреть под микроскопом.
5. Сравнить эффективность использованных методов разрушения дрожжевых клеток.
