Дайте оценку санитарно-показательным микроорганизмам воды, воздуха, смывов с рук и объектов внешней среды

Санитарно-показательными называют микроорганизмы (СПМ), по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.
Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специаль­ных камер или электронным счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые от погибших бактерий; 2) посевом на питательные среды.
СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно оби­тать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.

Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий.

Кишечные палочки как санитарно-показательные микробы наиболее полно соответствуют требованиям, предъявляемым к таким микроорганизмам. Они являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в больших количествах выделяются в окружающую среду. Сроки их выживания во внешней среде немного превышают сроки сохранения патогенных представителей кишечных бактерий в тех же условиях или совпадают с ними.

К БГКП относятся не только эшерихии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки: короткие, грамотрицательные, неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, не обладают оксидазной активностью. Отрицательная оксидазная проба позволяет дифференцировать семейство Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, обладающих ферментом оксидазой.

Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных.

 

Микробиологический контроль возду­ха проводится с помощью методов естест­венной или принудительной седиментации микробов. Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри. Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специаль­ных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для при­нудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактерио­логический и др.). Импшджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотоничес­кий раствор хлорида натрия.

Воздух (CO₂) менее благоприятен для м/о вследствии:

· отсутствия питательны веществ

· различных климатических условий

· высушивания

В воздухе обнаружены микробы: кокки, сарцины, бациллы, грибы. Все они отличаются устойчивостью к высушиванию.

Заболевания передаются:

· воздушно-капельным путём (грипп, корь, коклюш, дифтерия)

· воздушно-пылевым путём (туберкулёз, туляремия)

Микробное число воздуха – количество м/о в 1 м³ воздуха.

Для определения микробного числа используют 3 метода:

1. седиментационный – для определения бактериальной обсеменённости воздуха в закрытых помещениях

· чашку с МПА открывают на 5-10 минут в помещении

· чашку закрывают и инкубируют при температуре 37 в течение 24 часов

· подсчитывают колонии

· используя формулу Омелянского высчитывают микробное число

 аспирационный – используют аппарат Кротова

· в сосуд ставят чашку с питательной средой

· выполняют посев воздуха

· инкубируют в термостате

· подсчитывают колонии

2. фильтрационный – продувается через мембранные фильтры, которые высеивают на питательную среду.

В больничных и детских учреждениях помимо микробного числа определяют наличие санитарно-показательных м/о – гемополитических стафилококков, стрептококков.

Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки — даже дольше. Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph, aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков. Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в лабораторной практике ограничиваются выделением Staph, aureus.

Вода является естественной средой обитания для многих видов м/о: кокки, вибрионы, спириллы, спирохеты, фотосинтезирующие, грибы, вирусы. Грунтовые подземные воды чище, т.к. вода фильтруется через почву и многие микробы задерживаются. В открытых водоёмах количество микробов зависит от климатических условий, течения, рН, загрязнения сточными водами. В стоячем водоёме м/о на дне больше.

Сроки выживания патогенных м/о в H₂O зависит от:

· вида м/о

· количества

· температуры воды

· насыщенности организма веществами

Вода играет важную роль в передаче инфекций брюшного тифа, холеры, дифтерии, вирусного гепатита А.

Хорошая питьевая вода – в 1 мл не более 100 м/о

Сомнительная – от 100-150 м/о

Загрязнённая – 500 и более м/о

Микробное число – количество м/о в 1 мл воды.

Кишечная палочка является санитарно-показательным микроорганизмом, указывающим на фекальное загрязнение, поэтому в целях санитарно-бактериологического контроля исследуют воду, пищевые продукты, смывы с предметов обихода на наличие разделяют коли-титр и коли-индекс. Определяется (м/о E.coli):

1. 1 мл воды налить в стерильную чашку Петри и залить расплавленным или охлаждённым МПА.

2. поставить в термостат, темп. 37 градусов, на сутки.

3. подсчитать кол-во колоний

Коли - титр — наименьшее количество исследуемого материала в миллилитрах или граммах, в котором обнашивают кишечную палочку. Коли-индекс — количество особей кишечной палочки, обнаруженное в 1 л кости или в 1 г плотного вещества.

Нормы:

· коли-индекс – не более 3 E.coli в 1 л

· коли-титр – не менее 300 мл

· микробное число – не более 100

Присутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и других объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерококки являются нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю среду в меньших количествах, чем кишечные палочки. Энтерококки быстрее отмирают в воде и почве. Как правило, они не размножаются в этих объектах, что позволяет рассматривать их как показатель свежего фекального загрязнения.

Проанализируйте следующую ситуацию: при посеве испражнений больного ребенка на среду Эндо выросли ярко-красные колонии, характерные для кишечной палочки. Как продолжить исследование для того, чтобы доказать, что это колиэнтерит? Какие микроорганизмы вызывают колиэнтерит? Дайте их характеристику.

Существуют патогенные серотипы кишечных палочек (так называемые энтеропатогенные кишечные палочки), которые вызывают различные кишечные заболевания у детей и взрослых. Заболевания, вызываемые энтеропатогенными кишечными палочками, называются эшерихиозами.
Инфекция носит экзогенный характер, передается через грязные руки, предметы обихода, пищевые продукты.
Дифференциация эшерихий проводится на основании антигенной структуры. Различают капсульные антигены (К) трех разновидностей (А, В и L), соматические О-антигены и жгутиковые Н-антигены.

В настоящее время принято разделение эшерихий, вызывающих поносы у людей, на три группы:
1) энтеропатогенные кишечные палочки, возбудители колиэнтерита у детей раннего возраста (до 1 года)
2) энтероинвазивные (ЭИКП), возбудители дизентериеподобных заболеваний у детей старше 1 года и взрослых:

3) энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП), возбудители холероподобных заболеваний у детей (в возрасте от 6 мес до 2 лет) и взрослых:

Микробиологическая диагностика. При эшерихиозах исследуют испражнения, рвотные массы, у новорожденных и грудных детей — слизь из носоглотки. При пищевых токсикоийфекциях исследуют подозрительные пищевые продукты. Материалы засевают на дифференциально-диагностические среды Эидо, Левина и др. Дальнейшему изучению подвергают колонии — красные с металлическим блеском на среде Эндо и сине-фиолетовые на среде Левина. Для определения серотипа ставят реакцию ориентировочной агглютинации на стекле с поливалентными ОК-сыворотками снимая для этого часть колонии. Оставшуюся часть колонии, дающей агглютинацию, пересевают на скошенный агар и «пестрый ряд» Гисса или на среду Ресселя. На следующие сутки учитывают результаты ферментации углеводов в средах Гисса. Для установления серологической группы ставят реакцию агглютинации на стекле с каждой типовой ОК-сывороткой, входящей в состав поливалентной ОК-сыворотки.

 

Ход: поставить реакцию агглютинации с поливалентной (ОК) эшерихиозной сывороткой и 5-10 красными (лактозоположительными) колониями. Пересеять остатки колонии, давшей реакцию агглютинации с поливалентной (ОК) сывороткой на косой агар для выделения чистой культуры. Поставить реакцию агглютинации с монорецепторными сыворотками, входившими в поливалентную. При положительной реакции на стекле с одной из сывороток ставят развернутую реакцию агглютинации в 2-х рядах. В 1 ряду разводят сыворотку до титра О-антител и добавляют по 2-3 капли смыва гретой культуры для выявления О-антигена, во 2 ряду разводят сыворотку до титра К-антител и добавляют по 2-3 капли живой исследуемой культуры для выявления типа К-антигена. Реакция в 2-х рядах должна дойти до титра или ½ титра диагностической сыворотки. По ней и определяют серовариант эшерихий.

Проанализируйте следующую ситуацию: у группы рабочих, которые обедали в одной и той же столовой, появились признаки острого пищевого отравления. Назовите возможного возбудителя пищевого отравления. Разработайте план для его выявления.

Сальмонеллы, золотистый стафилококк, протей, иерсинии, кишечная палочка, возбудители ботулизма.
Для определения источников инфекции необходимо исследовать остатки пищевых продуктов, рвотные массы или промывные воды желудка, фекалии. Основной метод для идентификации микроорганизмов - бактериологический метод. Источник инфекции необходимо искать среди работников пищеблока. Необходимо определить эпидмаркеры у всех выделенных культур при обследовании работников пищеблока и больных (фаговар, серовар, бактериоциновар). Если они совпадают – источник один, если разные – несколько источников инфекции. Проводится бактериологическое исследование с целью выделения чистой культуры S. аureus, т.к. пищевое отравление при употреблении подобных продуктов чаще вызывает S. аureus. Проводят посев материала на МЖСА и кровяной агар. Отбор подозрительных колоний на МЖСА: крупные или средние золотистые колонии с лецитиназным перламутровым венчиком вокруг; на кровяном агаре: такие же колонии с зоной гемолиза вокруг. Постановка каталазного теста, который должен быть положительным. Пересев золотистой колонии на пробирку со скошенным агаром для выделения чистой культуры. Идентификация по морфологическим и тинкториальным свойствам в мазке, окрашенном по Граму (грамположительный стафилококк в форме типичных виноградных гроздей). Посев культуры в полужидкую среду Гисса с маннитом. Выращивание в анаэробных условиях под слоем вазелинового масла. S. аureus разлагает маннит с образованием кислоты в анаэробных условиях. Посев культуры в пробирку с цитратной кроличьей плазмой. S. аureus коагулирует плазму (наличие фермента плазмокоагуляции).

Про выявление ботулотоксина в 34 вопр.

Расследование пищевых отравлений производится немедленно (в первые 24 часа) после получения экстренного извещения. Обследовать пищевой объект, с которым связано пищевое отравление, изъять остатки подозреваемого пищевого продукта, запретить его реализацию (временно приостанавливается работа пищевого объекта). Данный вид санитарного обследования (контроля) относится к чрезвычайному и предполагает тщательное изучение причин пищевого отравления с возможной экспертизой каждого этапа производства и оборота подозреваемого продукта. В ходе обследования в первую очередь устанавливаются: источник инфекции, пути и факторы передачи инфекции, условия, способствующие размножению микроорганизмов и токсинообразованию в продукте, условия, обеспечивающие сохранность микроорганизмов и их токсинов в процессе кулинарной обработки.

Основные точки контроля:

· - документация на продукт (сырье); санитарные условия перевозки;

· - условия и сроки хранения продукта или сырья;

· - технологический процесс приготовления продукта;

· - документы, характеризующие его качество и сроки реализации (меню и раскладки к ним, бракеражный журнал как правило, за 2-3 дня предшествующих заболеванию);

· - документация, подтверждающая контроль здоровья персонала (журналы предварительных, периодических медицинских осмотров, ведение ежедневного журнала «Здоровье»);

· - уровень санитарно-гигиенического обеспечения производства (в том числе качество используемой воды);

лиц виновных в производстве или реализации продукции, вызвавшей пищевое отравление, привлекает к административной ответственности или передает материалы расследования в прокуратуру для привлечения к уголовной ответственности.

 

Проанализируйте следующую ситуацию: Пищевое отравление у группы рабочих было связано с употреблением булочек с кремом, купленных в буфете предприятия. Какой материал подлежит исследованию. Назовите возможных возбудителей пищевого отравления. Разработайте план для выявления возбудителя.

1) Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, остатки пищи (крем).

2) Проводится бактериологическое исследование с целью выделения чистой культуры S. аureus, т.к. пищевое отравление при употреблении подобных продуктов чаще вызывает S. аureus. Проводят посев материала на МЖСА и кровяной агар. Отбор подозрительных колоний на МЖСА: крупные или средние золотистые колонии с лецитиназным перламутровым венчиком вокруг; на кровяном агаре: такие же колонии с зоной гемолиза вокруг. Постановка каталазного теста, который должен быть положительным. Пересев золотистой колонии на пробирку со скошенным агаром для выделения чистой культуры. Идентификация по морфологическим и тинкториальным свойствам в мазке, окрашенном по Граму (грамположительный стафилококк в форме типичных виноградных гроздей). Посев культуры в полужидкую среду Гисса с маннитом. Выращивание в анаэробных условиях под слоем вазелинового масла. S. аureus разлагает маннит с образованием кислоты в анаэробных условиях. Посев культуры в пробирку с цитратной кроличьей плазмой. S. аureus коагулирует плазму (наличие фермента плазмокоагуляции).

 

Проанализируйте следующую ситуацию: Больной поступил в больницу с подозрением на ботулизм. Какой материал подлежит исследованию. По каким особенным признакам необходимо идентифицировать культуры микроорганизма.

Ботулизм — тяжёлое токсикоинфекционное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы, преимущественно продолговатого и спинного мозга, протекающее с преобладанием офтальмоплегического и бульбарного синдромов.
Отравление токсином возможно только при употреблении продуктов, в которых в анаэробных условиях произошли размножение возбудителя и накопление токсина. Анаэробные условия создаются в результате герметизации продуктов или потребления кислорода аэробной флорой (например, стафилококком).
Некоторые виды консервов являются хорошей питательной средой для прорастания сохранившихся в них спор и токсинообразования. К таким консервам относится прежде всего кабачковая икра, а также рыбные и мясные консервы. Выработка ботулинических токсинов в них может происходить не только при температуре 35°, но и при 16-18°, если консервы были заражены массивными дозами спор (не менее 10000 спор на одну банку). Присутствие жизнеспособных возбудителей ботулизма и наличие токсина в консервной банке наблюдалось в ряде случаев при отсутствии бомбажа и изменения органолептических свойств продуктов. Большую опасность в отношении ботулизма представляют различные продукты из свинины (сырокопченые окорока, ветчина) домашнего приготовления и копчения. Продукты из свинины по частоте случаев ботулизма, вызванных ими, занимают четвертое место.

Развивается в результате попадания в организм пищевых продуктов, воды или аэрозолей, содержащих ботулотоксин, продуцируемый спорообразующей палочкой Clostridium botulinum — анаэробная грамположительная бактерия рода клостридий. Возбудители ботулизма имеют форму палочек длиной с закругленными концами. Палочки образуют субтерминально расположенные споры и имеют вид теннисной ракетки. Капсулы не образуют. Строгий анаэроб, срок культивирования 48–72 ч. На мясо-пептонном бульоне — помутнение среды с газообразованием, характерный запах прогорклого масла. На кровяном МПА — колонии крупные с корневидными отростками и зоной гемолиза. Оптимальная кислотность для роста 7,3–7,6 (для прорастания спор 6,0–7,2).

 ЭТО МОЖНО УВИДЕТЬ В МИКРОСКОП ПРИ ОКРАСКЕ ПО ГРАМУ.

Возбудитель ботулизма относится к группе факультативных паразитов, способный существовать во внешней среде. Естественный резервуар - почва и различные животные. Многие штаммы лучше размножаются при 25°С, что подчеркивает независимость от теплокровных животных.
Основным фактором патогенности является ботулинический экзотоксин, продуцируемый вегетативными клетками. Ботулотоксин поражает мотонейроны передних рогов спинного мозга, вследствие чего нарушается иннервация мышц, развивается прогрессирующая острая дыхательная недостаточность.

Известно 8 серологических вариантов ботулинического токсина и, соответственно, 8 серотипов C. botulinum — A, B, C1, C2, D, E, F, G.
Ботулинический токсин считается самым сильным ядом биологического происхождения. Человек поражается только токсинами А, В и Е.

Методы диагностики

Метод выявления С. botulinum основан на его способности развиваться и образовывать ботулинические токсины в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.

Выделение культур токсигенных штаммов С. botulinum из продукта или культуральной жидкости проводят путем высева на твердые питательные среды с последующим исследованием культуральных и морфологических признаков, характерных для С. botulinum, и определением способности выделенной культуры образовывать ботулинический токсин.

Методы предназначены:

· для исследования продуктов по санитарно-эпидемиологическим показаниям;

· для анализа посевов продуктов, в случае обнаружения в них мезофильных анаэробных микроорганизмов.

Исследования проводят в лабораториях, указанных органами здравоохранения.
Общеклинические методы диагностики, такие, как анализы мочи, кала, каких-либо особенностей, характерных для ботулизма, не имеют. Учитывая выраженные метаболические нарушения, показан контроль кислотно-основного состояния в динамике. При дифференциальной диагностике с нейроинфекциями важное значение при нечёткости клинической картины и неубедительных результатах РН токсина приобретают исследования ликвора (при ботулизме не изменена).

Материалом для бактериологического исследования служат фекалии и рвотные массы больного, промывные воды желудка и кишечника, содержимое ран (при раневом ботулизме), подозреваемая пища. Так как сразу поставить диагноз «ботулизм» у взрослого больного сложно, то проводят обнаружение токсина в исследуемом материале. Исследование проводят на белых мышах. Им внутрибрюшинно вводят жидкость, полученную после центрифугирования сыворотки крови больного в смеси с противоботулинической сывороткой типов А, В, Е. Исследование проходит 4 дня. За это время мыши, не защищённые тем типом антитоксина, которым вызвано заболевание у пациента, погибают. Остаются живыми мыши, которым вводили сыворотку, соответствующую типу токсина, циркулирующего в крови больного.
Серологическое типирование токсина С. botulinum осуществляется на белых мышах путем постановки защитного теста in vivo или реакции нейтрализации in vitro с диагностическими противоботулинистическими типоспецифическими антитоксическими сыворотками.

 

После употребления в пищу грибов домашнего консервирования в семье отмечено 2 случая острого отравления с неврологическими симптомами. С помощью какого лабораторного исследования может быть выяснена этиология данного заболевания? Дайте характеристику возбудителя

34.