Таблица 3. Питательные среды для первичного посева в соответствии с исследуемым материалом

Условное обозначение: + рекомендуемая среда.

Общим правилом является использование при посеве материала, содержащего смешанную микрофлору (испражнения, гной и т.п.), пластинчатых сред высоко селективного действия (Плоскирева, ВСА, с добавлением антибиотиков и др.). Материал, обычно стерильный (кровь, спинномозговая жидкость и т.п.), сеют на слабо селективные дифференциальные среды (ЭМС, Эндо) или СПА.

С целью накопления сальмонелл при исследовании испражнений или другого материала, содержащего обильную сопутствующую флору, могут быть использованы такие среды, как магниевая, селенитовая, Кауфмана или Мюллера, а при исследовании крови, спинномозговой жидкости и соскоба с розеол - желчный бульон, среда Рапопорт или (для крови) дистиллированная и водопроводная вода. Для накопления иерсиний при исследовании всех материалов применяют буферную среду или ИХН, а для клебсикелл и энтеробактеров при исследовании крови - глюкозный бульон.

Прямой посев исследуемой пробы материала на пластинчатые селективно-дифференциальные среды и посев (при необходимости) в пробирку с жидкой средой обогащения проводят одновременно. При посеве на плотные среды исследуемый материал наносят с помощью бактериологической петли, стеклянной палочки, ректального тампона или пипетки с последующим втиранием материала шпателем или петлей по всей поверхности среды. На высоко селективные среды посевной материал вносят в большем объеме (в 3-5 раз), чем на слабо селективные. В средах с антибиотиками, приготовленных "методом градиентной чашки" или с использованием бумажных полосок, посевной материал вносят в зону среды с антибиотиком и распределяют его далее, как описано. Посев в среды для "метода подвижного роста" проводят в соответствии с "Методическими рекомендациями по выделению сальмонелл из испражнений методом "подвижного роста" (МЗ СССР, 1978).

Все указанные посевы (кроме целенаправленных посевов для выделения иерсиний) инкубируют при 37°C в течение 18-20 часов (до 48 часов на ВСА). Инкубация засеянной селенитовой среды не должна превышать 18 часов. По окончании инкубации из сред обогащения для сальмонелл делают высевы на ВСА (при исследовании материала, содержащего сопутствующую микрофлору), а при исследовании крови, спинномозговой жидкости и соскоба с розеол - на среды Эндо (ЭМС), СПА, на последние делают высев также из сред обогащения для иерсиний и клебсикелл (энтеробактеров), соблюдая правила посева и инкубации, как при прямом посеве.

При целенаправленном исследовании для выделения иерсиний лучше использовать среду Эндо, чем ЭМС. Посевы на этих средах инкубируют при 22° - 25°C в течение 18-48 часов, просматривая чашки повторно через 48 часов инкубации. Засеянную буферную среду или ИХН сохраняют в холодильнике (4° - 6°C), первый высев на пластинчатую среду проводят через 24-36 часов инкубации, а при отрицательных результатах высевы повторяют на 5, 7, 11 и 14 дни инкубации.

Помимо указанных общих правил, требуется соблюдение особенностей посева с учетом характера исследуемого материала.

Испражнения, если они доставлены без консерванта, суспендируют в ИХН в соотношении 1:5 или 1:10, после чего используют для посева на пластинчатые среды. Неразведенные испражнения вносят в среду обогащения в соотношении 1:5 и тщательно перемешивают. При взятии материала ректальным тампоном его погружают в среду обогащения после посева на пластинчатые среды.

При посеве в селенитовую среду обогащения испражнений, доставленных в лабораторию в фосфатно-буферном консерванте (но не в глицериновом), возможно применение среды двойной концентрации с соблюдением соотношения посевного материала и среды 1:1.

Кровь. Через 18-20 часов после посева, выполненного, как указано в предыдущем разделе, и инкубации при 37°C делают высев на одну из слабо селективных пластинчатых сред или на СПА, при отрицательных результатах высевы повторяют на 3, 4, 6 и 10 сутки.

Рвотные массы и промывные воды желудка, не подвергавшиеся центрифугированию, засевают с целью обогащения в соответствующие накопительные среды двойной концентрации, соблюдая соотношения засеваемого материала и среды 1:1, при посеве центрифугата применяют среды обогащения обычной концентрации.

Желчь (дуоденальное содержимое) засевают во флаконы с 50 мл СПБ в соотношении 1:10 и на пластинчатые среды (Эндо, ЭМС). Оставшуюся желчь также помещают в термостат, делая из нее высев через 18-20 часов и на 3, 5, 7 сутки (в случае отрицательных результатов предыдущих высевов) на пластинчатые среды подобно высевам со сред обогащения.

Мочу после центрифугирования (или без него) сеют на пластинчатые среды (ЭМС, Эндо), а также в среды обогащения, нецентрифугированную мочу - в среды двойной концентрации в соотношении 1:1.

Гной, пунктаты органов, экссудат, слизь из зева и носа, мокроту, отделимое цервикального канала*(3), женское грудное молоко*(3) засевают в жидкие среды обогащения и на плотные питательные среды (табл. 3).

Спинномозговую жидкость засевают в жидкие питательные среды для обогащения и на пластинчатые среды (табл. 3).

Соскоб с розеол, полученный, как указано в предыдущем разделе, засевают в среду обогащения с последующим высевом на пластинчатые среды.

Операционный материал - содержимое червеобразного отростка, желчного и мочевого пузыря исследуют как испражнения, желчь и мочу соответственно, а биоптаты органов или тканей засевают аналогично секционному материалу.

Секционный материал засевают, как указано в разделе "Материал для исследования" либо непосредственно на пластинчатые среды путем прикосновения (отпечатка) поверхности среза кусочков органов к агару, либо после получения взвеси засевают на плотные среды и, если это необходимо, в среды обогащения. Кровь, мочу, желчь исследуют, как указано для этих материалов.

После культивирования посевов, просмотра чашек и отбора выросших колоний для дальнейшего исследования руководствуются их характеристиками, приведенными в соответствии с родовой принадлежностью энтеробактерий (табл. 4). Следует помнить, что колонии, подозрительные на принадлежность к шигеллам или сальмонеллам, подлежат первоочередному отсеву и изучению (не менее 3 колоний). При их отсутствии и показаний к исследованию с целью выделения других представителей энтеробактерий снимают для изучения по 2-3 колонии с различными морфологическими характеристиками.