Определение фаговаров S. typhi

Для определения фаговаров S. typhi используют стандартную схему с применением 45 препаратов, адаптированных Vi II-бактериофагов и неадаптированного Vi I-бактериофага, предназначенного для выявления в культуре Vi-антигена. Бактериофаги и соответствующие им фаговары штаммов обозначают заглавными буквами латинского алфавита (от A до T включительно) и частично арабскими цифрами (от 27 до 46). Условием для определения фаговара культуры является наличие в ней Vi-антигена, с которым связана чувствительность ее к Vi-бактериофагам.

Если штамм дает слабую реакцию Vi-агглютинации, а результаты определения фаговара нечеткие, штамм рассевают и под контролем Vi-сыворотки отбирают колонии, наиболее богатые Vi-антигеном, которые вновь подвергают исследованию на определение фаговара. Для отбора колоний 3-4-часовую бульонную культуру высевают на чашку со СПА. Вторым обязательным условием для определения фаговара является использование типовых Vi II-бактериофагов в рабочих тест-разведениях, которые указывают либо в приложении к набору, либо на этикетках ампул с фагом.

Фаговар культуры определяют в соответствии с приведенной схемой (табл. 47), включающей 45 бактериофагов, позволяющих выявить такое же число фаговаров.

Таблица 47. Схема определения фаговаров S. typhi

Обозначения: CL - сливной лизис; SCL - полусливной лизис; "+++" - отдельные негативные колонии (более 20); "++" - отдельные негативные колонии (до 20); "+/-" - единичные колонии; "-" - отсутствие лизиса.

Штаммы фаговара A лизируются всеми Vi II-фагами. Подразделение фаговара на подфаговары в группах B, C, D, E и т.д. построено таким образом, что штаммы подфаговара с порядковым номером 1 (B1, C1, D1, E1 и т.д.) лизируются не только гомологичным фагом, но и всеми другими фагами данной группы.

Для штаммов некоторых фаговаров (B1, B2, B3, C) характерна чувствительность к ряду фагов, в т.ч. и неродственных групп.

Для проведения этого исследования суточную агаровую культуру изучаемого штамма (после проверки на содержание в ней Vi-антигена с помощью Vi-сыворотки) пересевают в пробирку с 2-3 мл мартеновского или хоттингеровского бульона (pH 7,0-7,2) и инкубируют в термостате при 37°C 3-4 час. Молодую бульонную культуру вносят в чашку Петри с 25-30 мл 1,5-1,7-% СПА, хорошо подсушенного. Чашки с агаром готовят накануне, оставляя их в термостате с закрытыми крышками, а на следующий день подсушивают с открытыми крышками в течение 20-30 мин. Культуру наносят на агар в чашке петлей (диаметром 5 мм) или тонко оттянутой пастеровской пипеткой в виде отдельных капель. Число капель культуры должно быть на 3 единицы больше числа используемых бактериофагов: одну из них испытывают с Vi I-фагом, вторую с O-поливалентным сальмонеллезным фагом и третья капля служит контролем культуры (вместо фага на нее наносят каплю бульона). Культуру можно засеять на чашку в виде сплошного газона, на который после подсыхания наносят петлей или тонко оттянутой пастеровской пипеткой Vi II-бактериофаги в тест-разведениях, а также Vi I- и O-фаги. После подсыхания капель фага чашки оставляют в термостате при 37° C и учитывают результаты дважды (через 5-6 час. и 18-20 час.). Учет проводят невооруженным глазом или с помощью 5-кратной лупы через дно чашки в проходящем свете. Фаговар культуры определяют в соответствии с указанной схемой. При определении фаговаров возможны результаты, отклоняющиеся от указанных в схеме: а) культура лизируется Vi-фагом, но нечувствительна ни к одному из Vi II-бактериофагов. Причина этого: выделение штамма, к которому Vi II-фаги еще не открыты или отсутствуют в используемом наборе; изучаемый штамм относится к тем культурам, к которым Vi II-бактериофаги не могут быть адаптированы (Vi I-штаммы); б) культура содержит Vi-антиген, лизируется несколькими Vi II-фагами, но спектр лизиса не соответствует ни одному из представленных в схеме (полилизабельные, деградированные штаммы), для их успешного исследования рекомендуется изучить несколько колоний (2-4), т.к. некоторые из них могут сохранять признаки определенного фаговара. Нередко полилизабельные культуры проявляют выраженную однотипность в спектре чувствительности к Vi II-бактериофагам, что может быть использовано как эпидемиологическая метка при выделении таких штаммов от разных лиц или других источников; в) культуры, не обладающие Vi-антигеном, хорошо лизирующиеся O-фагом и не чувствительные ни к одному из Vi-фагов, обозначают как W-форму.

Определение фаговаров S. paratyphi B

Для определения фаговаров S. paratyphi B используют международную стандартную схему Феликса и Келлоу (10 фагов), дополненную 5 фагами*(16). С помощью этой схемы удается установить 10 основных фаговаров S. paratyphi B и 19 их постоянных подфаговаров. Определение фаговаров S. paratyphi B основано на определении спектра лизиса несколькими фагами. Методика определения фаговаров та же, что для S. typhi, однако для S. paratyphi B делают две дополнительные капли культуры (одна для испытания с O-фагом, другая для контроля культуры).