Задания для выполнения лабораторной работы

ВОЗБУДИТЕЛИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ И ДРУГИХ ВОЗДУШНО-КАПЕЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

 

Возбудители инфекций, передающихся воздушно-капельным путем (табл. 9), относятся к разным семействам, родам и видам, которые существенно отличаются друг от друга по морфологии, культуральным и биохимическим свойствам, антигенной структуре. Респираторные инфекции разной этиологии клинически диагностируются как острые респираторные заболевания (ОРЗ) или пневмонии. Их возбудители могут быть идентифицированы только с помощью микробиологического исследования. В этиологии ОРЗ и пневмоний важную роль играют сложные микробные ассоциации, преимущественно бактериальные и вирусно-бактериальные.

 

Таблица 9. Возбудители бактериальных воздушно-капельных инфекций

Наименование возбудителя

Заболевание или синдром

Staphylococcus aureus (+) А Streptococcus pneumonia (+) А S. pyogenes (+) А Klebsiella pneumonia (-) А Mycoplasma pneumonia А Chlamydia psittaci Coxiella burnetii Escherichia coli (-) А Enterobacter spp. (-) А Proteus spp. (-) А Bacteroides spp. (-) Ан Peptococcus spp. (+) Ан Vellonella spp. (-) Ан Haemophilus influenzae (-) А Bordetella pertussis (-) А Bordetella parapertussis (-) А Corynebacterium diphtheriae (+) А Mycobacterium tuberculosis (к/у) А Actinomyces bovis (+) Ан Neisseria meningitides (-) А

Пневмония То же -//- -//- -//- -//- Q-лихорадка (пневмония) Пневмония (аспирационная) То же -//- Пневмония, абсцесс легких То же Пневмония, синусит, отит Пневмония, бронхит Коклюш Паракоклюш Дифтерия Туберкулез легких Актиномикоз легких Менингококковая инфекция

Условные обозначения: (+) – грамположительные, (-) – грамотрицательные, (к/у) – кислотоустойчивые, А – аэробы, Ан – анаэробы.

 

Другие бактерии вызывают более избирательные поражения. Так, Вordetella pertussis, как правило, локализуется в эпителии дыхательных путей. Соrynebacterium diphteriae вызывают патологический процесс главным образом в зеве, кроме того, возникают системные поражения, связанные с токсинемией. Менингококки локализуются в носоглотке и вызывают фарингиты, назофагиты, а проникая в мозговые оболочки и кровь, - менингит и сепсис. К бактериям, вызывающим специфические поражения респираторного тракта, относятся возбудители туберкулеза и актиномикоза. Вместе с тем эти бактерии поражают также и другие органы (кишечник, печень, кости, суставы и др.). Вызванные всеми упомянутыми бактериями заболевания существенно различаются по клинической картине и патогенезу.

Для выявления бактерионосителей используют главным образом бактериоскопический и бактериологический методы, иногда биопробы. Экспресс-диагностика осуществляется иммунофлюоресцентным методом. Микробиологическая диагностика респираторных заболеваний, вызванных стафилококками, стрептококками, а также анаэробными бактериями проводится методами, которые излагаются в предыдущих темах.

 

Лабораторная диагностика менингококковой инфекции, коклюша и дифтерии

Задания для выполнения лабораторной работы

1. Указать приспособления (виды тампонов) для взятия материала при менингококковой инфекции, коклюше и дифтерии.

2. Микробиологическое исследование при менингококковой инфекции, коклюше и паракоклюше:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

б) бактериоскопический метод: микроскопировать готовые мазки из спинномозговой жидкости и носоглотки, сделать заключение и наметить план дальнейшего исследования;

в) бактериологическое исследование и иммунохимический метод;

г) по результатам, полученным из лаборатории, сделать заключение.

3. Микробиологическое исследование при дифтерии:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

б) бактериоскопический метод: микроскопировать мазки из материала, взятого из зева лиц с подозрением на дифтерию или бактерионосительство, сделать предварительное заключение и наметить ход дальнейшего исследования для подтверждения бактериоскопического диагноза;

в) бактериологический метод: описать рост культуры, полученной на свернутой сыворотке, и колоний на теллуритовой среде, отметить результаты готовых посевов исследуемых культур на средах "пестрого" ряда, в случае обнаружения С.diphtheriae определить ее токсигенность. Сопоставить данные бактериоскопического и бактериологического исследований с целью идентификации выделенной культуры и поставить окончательный микробиологический диагноз.

4. Дать краткую характеристику диагностическим, профилактическим и лечебным препаратам.

 

Методические указания

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Материал для исследования: спинномозговая жидкость, кровь, мазки со слизистой оболочки верхних отделов носоглотки, аспират из высыпных элементов. При обследовании на носительство материал из верхних отделов носоглотки берут специальным носоглоточным тампоном (который на 3/4 длины сгибают под углом 45°). При доставке в лабораторию его предохраняют от охлаждения и высушивания, поскольку менингококк очень чувствителен к воздействию этих факторов. Спинномозговую жидкость берут в количестве 2-5 мл и делят на две части: одну центрифугируют и исследуют осадок, к другой добавляют полужидкую питательную среду и выдерживают при 37 °С для накопления бактерий. Из исследуемого материала готовят мазки и производят посевы.

Бактериоскопическое исследование (схема 8). Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по методу Грама и микроскопируют. При наличии гноя в большинстве случаев обнаруживаются типичные грамотрицательные диплококки, имеющие характерное расположение внутри лейкоцитов, что позволяет сделать окончательное заключение о менингококковой инфекции. При микроскопии мазков из носоглотки бактерионосителей наряду с менингококком обнаруживаются грамположительные стафилококки и стрептококки, а также непатогенные нейссерии (Moraxella spp. и др.). Дифференцировать их по морфологическим признакам затруднительно.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с питательным агаром, содержащим кровь, сыворотку крови или асцитическую жидкость. В среды добавляют антибиотик ристомицин (150 ЕД/мл), который задерживает размножение грамположительных кокков, содержащихся в исследуемом материале, и тем самым способствует выделению чистой культуры менингококка. Образование колоний менингококка на этих средах наблюдается через 48 ч после инкубации посевов при 37 °С в атмосфере с повышенным содержанием СО₂ (3-10 %) и высокой влажностью. В отличие от других кокков колонии менингококка величиной с булавочную головку прозрачны, имеют голубоватый оттенок и ровные края. Такие колонии пересевают в пробирку со скошенным агаром для получения чистой культуры. Идентификацию чистой культуры, дифференциацию от сапрофитных нейссерии, обитающих в носоглотке, проводят по ряду культуральных и биохимических признаков. Так, менингококк растет только в присутствии нативного белка, в то время как другие нейссерии размножаются на простых средах и образуют пигмент; на средах Гисса с добавлением сыворотки крови менингококк ферментирует глюкозу и мальтозу до кислоты.

Схема 8. Микробиологическое исследование при менингококковой инфекции и бактерионосительстве

Фаготипирование менингококка проводят для эпидемиологического анализа. Определение серовара производят в реакции агглютинации в пробирках.

Экспресс-методы диагностики. Иммунохимические исследования. Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала используют метод встречного иммуноэлектрофореза. Антигены возбудителя также могут быть обнаружены в материале от больного в реакциях непрямой латекс-агглютинации, РНГА и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР.

Серодиагностика. Для ретроспективного подтверждения диагноза используют РНГА с парными сыворотками.