Микробиологическая диагностика коклюша и паракоклюша

Материал для исследования: мокрота, слизь из носоглотки. Материал берут стерильным ватным тампоном из носоглотки больного ребенка. Для взятия материала у маленьких детей тампон, приготовленный на тонкой эластичной проволоке, вводят через нос.

Бактериоскопическое исследование (схема 9).Бактериоскопический метод как таковой при диагностике коклюша не применяется. Для быстрого обнаружения и идентификации Bordetella pertussis используют иммунофлюоресцентный метод.

Бактериологическое исследование. Основной метод лабораторной диагностики коклюша. Материал для посева берут с помощью носоглоточного тампона или методом "кашлевых пластинок". Для этого в момент появления кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту ребенка и держат в течение 6-8 кашлевых толчков. Правильное и раннее взятие материала позволяет выделить возбудителя в начальном периоде болезни от 80-90 % больных. Материал засевают на каменноКУА или кровяные среды - картофельно-глицериновый кровяной агар (среда Борде-Жангу) и молочно-кровяной агар. В питательные среды добавляют пенициллин для угнетения роста посторонней микрофлоры. Колонии B.pertussis на указанных средах обычно появляются через 48-72 ч культивирования. B.parapertussis - несколько раньше: через 24-72 ч. Бордетеллы образуют мелкие (диаметром около 1 мм) выпуклые влажные блестящие колонии. На КУА колонии имеют серовато-кремовый цвет, а на среде Борде-Жангу приобретают жемчужный или ртутный блеск. Колонии B.parapertussis более крупные. На среде Борде-Жангу и молочно-кровяном агаре они образуют ограниченную зону гемолиза. Из колоний, выросших на чашках, готовят мазки, окрашивают их по методу Грама и микроскопируют. При наличии в мазках овоидных грамотрицательных палочек ставят ориентировочную реакцию агглютинации с коклюшной и паракоклюшной сыворотками. Затем подозрительные колонии пересевают в пробирки для дальнейшего изучения чистых культур.

Идентификацию выделенной культуры производят на основании комплексного изучения морфологических, культуральных, биохимических и серологических свойств (табл. 10). В отличие от других бордетелл B.pertussis не растет на простом питательном агаре и не изменяет цвета специальных питательных сред.

Для определения уреазы в агглютинационные пробирки вносят 0,3 мл 2 % раствора мочевины, 0,3 мл густой суспензии испытуемой культуры и 2-3 капли 0,1 % спиртового раствора фенолфталеина. В положительном случае через 20-30 мин появляется малиновое окрашивание, указывающее на расщепление мочевины уреазой.

Серологическую идентификацию бордетелл, дифференциацию видов и определение сероваров (серотипирование) проводят в реакции агглютинации с адсорбированными факторными сыворотками. При этом исходят из того, что антиген (фактор) 7 является родовым, а антиген (фактор) 1 присущ только B.pertussis, 14 - B.parapertussis и 12 - B.bronchisepticas.

Таблица 10. Дифференциальные признаки Bordetella spp.

Условные обозначения: (+) - наличие признака; (-) - отсутствие признака; цифрами обозначены номера антигенов.

При бактериологической диагностике коклюша может возникнуть необходимость дифференциации бордетелл от Наетоphilus influenzae, который часто встречается на слизистой оболочке дыхательных путей и вызывает пневмонии и другие воспалительные заболевания дыхательных путей. В отличие от бордетелл Н.influenzae растет только на кровяных питательных средах - кровяном агаре, "шоколадном" агаре Левинталя, содержащих гемин и коэнзим дегидрогеназы. Бактериологическое исследование продолжается не менее 5 дней.

Схема 9. Микробиологическое исследование при коклюше и паракоклюше