Методика выполнения реакции Кумбса

История переливания

Система кровообращения в человеческом теле была описана в 1628 году английским ученым Уильямом Гарвеем. Он открыл закон кровообращения, вывел основные принципы движения крови в организме, что через некоторое время позволило приступить к разработке методики переливания крови.

В 1667 году было произведено первое успешное переливания крови от животного к человеку. Французский ученый Жан Батист Денни перелил приблизительно 250 мл. крови ягненка юноше, страдавшему лихорадкой, и больной якобы поправился.

Последовало еще несколько на первый взгляд успешных переливаний, но вскоре в практике Денни появились осложнения и смертельные случаи, и переливание крови во Франции было запрещено.

В 1795 году американский врач Филипп Синг Физик провел первое переливание крови от человека к человеку, однако не стал предавать свой опыт широкой огласке.

Настоящим прорывом в практике переливания крови стали эксперименты британского акушера Джеймса Бланделла, который в 1818 году спас жизнь одной из своих пациенток, перелив ей кровь мужа. Много работая над проблемами трансфузиологии, Бланделл изобрел первые удобные инструменты для взятия и переливания крови. В период с 1825 по 1830 год Бланделл произвел 10 трансфузий, пять из которых спасли жизни его пациентам. В 1830-1831 году Джеймс Бланделл опубликовал результаты своих исследований.

Используя изобретенные Бланделлом инструменты, и его методику, российский акушер Андрей Вольф в 1832 году сумел спасти роженицу с тяжелейшим послеродовым кровотечением. В 1840 году под руководством Бланделла английский врач Сэмюэль Армстронг Лэйн впервые использовал переливание крови для лечения гемофилии.

Однако, несмотря на явный прогресс, процент неудачных трансфузий все же оставался очень высоким, и переливание крови признавалась методом крайне рискованным.

В 1900 году австрийский врач Карл Ландштейнер открыл и описал первые три группы крови - A, В и С. Это стало настоящим прорывом в области трансфузиологии, и труд Карла Ландштейнера был высоко оценен – в 1930 году он стал лауреатом Нобелевской премии.
В 1902 году коллеги Карла Ландштейнера Альфред де Кастелло и Адриано Стурли добавили к списку групп крови четвертую - AB.
Все эти открытия дали мощный толчок исследованиям в области перекрестной совместимости крови, и уже в 1907 году в Нью-Йорке было произведено первое переливание крови больному от здорового человека, с предварительной проверкой крови донора и реципиента на совместимость. Врач, производивший это переливание, Рубен Оттенберг, со временем обратил внимание на универсальную пригодность первой группы крови.

Методы определения групп крови

Определение групп крови гемагглютинирующими сыворотками

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
• Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
• NaCl 0,9%
• Стеклянные палочки

Если агглютинации нигде нет – 1 группа, если есть везде – 4, если в анти А -2, если в анти В -3.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D по системе AB0 и системе Резус

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

• если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
• если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
• если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
• если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV)

3. Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов.

Резус точно так же определяют

Пробы при переливании крови

(совместимость определяют)

· Проба конглютинации с 33 % Полиглюкином

Правила определения:

1. в пробирку нанести 2 капли сыворотки крови пациента, 1 каплю донорской крови и 1 каплю 33 % раствора Полиглюкина;

2. перемешать содержимое в пробирке встряхиванием;

3. поворачивать и крутить пробирку так, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки;

4. через 5 мин добавить 2 мл NaCl 0,9%;

5. перемешивать содержимое 2 раза не взбалтывая.

Интерпретация результата:

1. Агглютинация в пробирке есть — кровь донора несовместима с кровью пациента

2. Агглютинации в пробирке нет — кровь донора совместима с кровью пациента

 

· Проба конглютинации с 10% желатином

Метод конглютинации с 10% желатином заключается в следующем. Необходимо в две пробирки поместить по 0,02 мл исследуемых эритроцитов: в первую пробирку добавить 0,1 мл 10% раствора желатина и 0,1 мл анти-резусной сыворотки, во вторую пробирку 0,1 мл 10% раствора желатина и 0,1 мл физиологического раствора. Содержимое перемешать. Пробирки инкубируют в термостате при температуре 45-48 С в течение 30 мин, после чего добавляют 5 мл физиологического раствора и переворачивают пробирки 1-2 раза для перемешивания.

Оценка результата конглютинации с 10% желатином

• Eсли произошла агглютинация — кровь резус-положительная
• Если НЕТ агглютинации — кровь резус-отрицательная
• B контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать

· Непрямой антиглобулиновыи тест (реакция Кумбса)

Реакция Кумбса наиболее чувствительна для антител к аутоантигенам эритроцитов и изоантигенам эритроцитов, основанная на использовании антиглобулиновой сыворотки. При обработке резус-положительных эритроцитов антителами анти-резус наступает реакция агглютинации.

Методика выполнения реакции Кумбса

В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты, помещают на 1 час в термостат при температуре 37⁰С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат.