VHS, или вирусная геморрагическая септицемия

Лекционное занятие

«Глава 2. Основы гигиены и санитария. Тема2.2 «Санитарно-эпидемиологические требования к предприятиям рыбного хозяйства. Вирусные и бактериальные болезни рыб»

План:

1. Вирусные болезни рыб.

1.1  VHS, или вирусная геморрагическая септицемия

1.2 Инфекционный некроз гемопоэтической ткани, или IHN

1.3 Инфекционный некроз поджелудочной железы, или IPN

1.4 Весенняя виремия карпа, или SVC

1.5 Герпесвирусные инфекции лососевых

2. Бактериальные болезни рыб

2.1 Фурункулез (ASS)

2.2 Иерсиниоз и болезнь «красный рот» (Enteric Red Mouth)

2.3 Бактериальная почечная болезнь (BKD, Bacterial Kidney Disease)

2.4 Вибриоз

2.5 Флавобактериозы

2.6 Холодноводной флавобактериозы

 

Вирусные болезни рыб

 

За 40 лет, прошедших со времени зарождения современной ви­русологии рыб, у культивируемых и диких рыб, моллюсков и ра­кообразных обнаружено около 250 вирусных агентов, из них около половины – у обитателей моря. Эта цифра удваивается каждые 7-8 лет. Интенсивные вирусологические исследования проводят в странах с высоким уровнем разведения рыб (США, Канада, Нор­вегия, страны Западной Европы, Япония).

Около четверти выявленных вирусов вызывают заболевания, наносящие серьезный ущерб аквакультуре. К наиболее опасным относятся весенняя виремия карпа, инфекционный некроз подже­лудочной железы, инфекционный некроз гемопоэтической ткани, папилломатоз атлантического лосося, болезнь поджелудочной железы лососевых, инфекционная анемия лосося, герпесвирусная болезнь лосося, вирусный некроз эритроцитов и др. Часть из них уже зарегистрирована в России, а угроза проникновения других заболеваний вполне реальна.

Основываясь исключительно на клинических признаках нельзя поставить диагноз вирусной болезни, так как зачастую они ассоциированы с бактериальными инфекциями. При клиническом осмотре у пораженных вирусом рыб отмечается вялость, снижение аппетита, на фоне почечной недостаточности возникает пучеглазие, увеличение передней части брюшка за счет скопления в полости тела жидкости, анемия, точечные кровоизлияния в периокулярной соединительной ткани глаза, на поверхности тела, у оснований и в межлучевой ткани плавников.

При патологоанатомическом вскрытие рыб обнаруживаются скопления прозрачного желтоватого, а иногда кровянистого экссудата, множественные кровоизлияния на серозных оболочках внутренних органов и мышечной ткани, анемичность внутренних органов (печень, селезенка, почки), катаральное или геморраническое воспаление желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Диагностика вирусных инфекций достаточно трудоемка.

Вирусы (от лат. virus – яд) являются самыми мелкими возбудителями заболеваний, представляют собой протеиновые капсулы, внутри которой находится нуклеиновая кислота одного типа – ДНК или РНК. Как правило, округлой формы, диаметр от 20 до 300 нм. Вирусы не являются самостоятельным организмом, для своего размножения они используют физиологическийпотенциал клетки-хозяина, прежде всего, связанный с делением и сохранением жизнеспособности. В зависимости от вида вируса, происходит разрушение клетки-хозяина или бесконтрольное размножение клеток, в результате чего образуется опухоль.

Вирусы нельзя изучить под обычным световым микроскопом, для этого необходим электронный микроскоп. В отличие от бактерий, вирусы не могут размножаться самостоятельно, поэтому их выращивают в культуре клеток рыб. Для этого в культуру клеток рыб добавляют фильтрат ткани или жидкости тела рыб, содержащий вирус, и отслеживают происходящие в клетке изменения.

Она базируется на взятии и транспортировании патматериала от больных рыб и его обработке в вирусологических лабораториях. Для выявления вируса проводят деконтаминацию патматериала и заражение (инокуляцию) им постоянных (перевиваемых) культур клеточных линий.

Постоянные клеточные линии представляют собой культуры клеток различных тканей, способные неограниченно долго расти и размножаться in vitro в специальных жидких питательных средах. Получено около 300 линий клеток преимущественно пресноводных рыб. Основные клеточные линии, необходимые для исследования патма-териалов от карповых и лососевых рыб, представлены в табл. 1.

 

 

Появление цитопатического эффекта в инокулированной культуре клеток свидетельствует о выделении цитопатогенного агента (в том числе и вируса). Выделенный агент в дальнейшем идентифицируют с помощью серологических реакций и подвергают электронной микроскопии. Для установления этиологической роли выделенного вируса ставят биологическую пробу, т. е. проводят экспериментальное заражение рыб выделенным вирусом. При положительной биопробе заболевание воспроизводится с типичными клиническими и патологоанатомическими признаками и гибелью зараженных рыб.

Наряду с вирусологическими методами, достаточно широко используются серологические лабораторные методы выявления вирусов: реакция нейтрализации (РН), реакция иммунофлуоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА).

Также молекулярно-генетические методы исследования такие как: ПЦР (полимеразно-цепная реакция), ПДРФ-анализ, ДНК-зондирование, нуклеотидноесеквенирование.

Использование современных молекулярных методов позволят проследить эволюцию вирусов, источники их распространения, выявить потенциальных переносчиков, выделить факторы, способствующие распространению их на большие пространства.

Иммуно-гистохимический метод в срезах тканей при различных видах окрашивания позволят выявить антигены вирусов рыб.

Микроскопические методы также достаточно часто используются при изучении вирусов.

Для постановки заключительного диагноза вирусного заболевания рыб применяют комплексный подход с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомическихданных и лабораторных методов исследования (рис. 1).

 

 

Рисунок 1 – Схема диагностики вирусных болезней рыб

 

VHS, или вирусная геморрагическая септицемия

Эта болезнь является одним из наиболее опасных контагиозных заболеваний лососсевых рыб при искусственном разведении рыб.

Возбудитель: вирусная геморрагическая септицемия (VHS – Viral Haemorragic Septicemia) вызывается рабдовирусом из рода Novihablovirus. Вирус пулевидной формы с хвостообразным придатком, размером 180-240 нм, содержит РНК. В настоящее время отнесен к группе рабдовирусов.

Устойчивость. Вирус плохо переносит кислые и щелочные среды, а в сухой среде вирус способен выживать в течение одной-трех недель (4°С). В водопроводной воде (10 °C) вирус сохраняется 49 дней, а в илистой воде (4 °C) – 10 дней. В условиях мороза вирус сохраняется несколько лет. VHS гибнет за несколько минут при температуре выше 50 °C.

Эпизоотология: вирус найден в нескольких европейских странах, а также в России и Северной Америке. В скандинавских странах болезнь отмечена в Дании, Норвегии, Швеции и Финляндии. В Финляндии болезнь впервые была зафиксирована в 2000 году на Аландских островах в рыбном хозяйстве, импортирующем радужную форель, а спустя всего несколько недель – на южном побережье, в Пюхтяя. На Аландских островах болезнь быстро распространилась, и санитарно-защитная зона охватила весь муниципалитет со всеми приморскими районами. В Пюхтяя также была установлена санитарно-защитная зона в связи с заболеваемостью VHS. В 2003 году случай VHS был зарегистрирован в рыбном хозяйстве, расположенном недалеко от Уусикаупунки. Для всех трех регионов была составлена программа по ликвидации VHS. В Пюхтяя и Уусикаупунки меры по ликвидации заболевания дали положительный результат, и санитарно-защитная зона в районе Пюхтяя была отменена в 2005 году. Санитарно- защитные ограничения в районе Уусикаупунки были сняты в 2011 году, поскольку в 2006 г. там повторно был зарегистрирован случай заболевания.

На данный момент Аландские острова – единственный регион в Скандинавии, где регулярно регистрируются случаи VHS. В Норвегии вирус был зафиксирован в последний раз в 2007 году, когда случай заболевания был отмечен на морской ферме, выращивавшей товарную радужную форель. Рыбы на ферме были уничтожены, а в помещениях была благополучно проведена санитарная обработка. Новых вспышек заболевания не последовало. У западного побережья Швеции случаи VHS были зарегистрированы четыре раза, три из которых – в 1998, 2000 и 2002 годах - относились к одной ферме по выращиванию радужной форели. Эти рыбы также были уничтожены, и в итоге ферма прекратила свою деятельность, поскольку источником заражения оказались нерестившиеся на ее территории сельди, приносившие с собой вирус. В Дании начиная с 1950-х годов болезнь проявлялась в виде эпидемий, но в результате активной борьбы ее удалось истребить.

VHS – это в основном болезнь радужной форели, но встречается она и у других лососевых (кумжа, сиг, хариус), а также у палтуса и щуки. Экспериментальным путем было воспроизведено заражение вирусом VHS 11 видов рыб. Всего случаи VHS зарегистрированы у 63 видов рыб. Вирус этой болезни выделен несколько раз у бессимптомных рыб, выловленных в акватории Балтийского моря, например, у салаки и миноги. Штаммы VHS, обнаруженные у миног и диких рыб в финских территориальных водах, относились к типу, отличному от тех, что были выделены у радужной̆ форели.

К заболеванию восприимчивы рыбы разного возраста: от сеголетков (у форели в возрасте старше 4 недель) до двухгодовиков (радужная форель) и трехгодовиков (тюрбо) товарной массой от 200 г до 700 г. Мальки, ремонтные рыбы и производители более устойчивы к заболеванию. Отмечены значительные индивидуальные и межпопуляционные колебания восприимчивости Рыб к ВГС.

Источником инфекции является больные рыбы и их выделения. Возникновению болезни способствует загрязнение воды, недоброкачественны корм.

Распространяется болезнь с водой, инвентарем, водными беспозвоночными, птицами, путем контакта здоровой и больной рыбы. Возможен занос вируса с икрой.

Заболевание развивается при температуре воды 3 – 14 °С и затухает при дальнейшем ее повышении. Обычно эпизоотии ВГС возникают в весеннее время (конец зимы – начало лета), но иногда регистрируются в конце лета и осенью. Наиболее остро болезнь протекает при 8–12 °С. При этом может погибнуть до 80–90 % рыб. При 3–5 °С заболевание протекает в хронической форме, но гибель может достигать 100 %. Молодь массой до 1–2 г болеет и при более высокой температуре воды (15–20 °С), что связано с несовершенством системы иммунитета у нее.

Клинические признаки и патологоанатомические изменен ия. Заболевание проявляется в форме экссудативно-геморрагического синдрома, развитие которого обусловлено размножением вируса в эндотелии кровеносных капилляров, гемопоэтической ткани и клетках экскреторной части почек, что ведет к нарушению водно-минерального баланса и выходу плазмы и форменных элементов крови в окружающие ткани и полости тела. Инкубационный период при температуре воды 7–15 °С колеблется от 1 до 2 недель.Болезнь обычно завершается за 1-2 мес.

Первыми признаками заболевания являются анорексия и угнетение рыб. Больные рыбы приобретают темную окраску, перемещаются к краям пруда или канала, где течение слабее. Они медленно дрейфуют по течению, с трудом сохраняя равновесие, прибиваются к решеткам стока. ВГС протекает в острой, хронической и нервной формах.

Острая форма заболевания характеризуется внезапной массовой гибелью рыб. У больных особей отмечают экзофтальм, побледнение жабр, точечные кровоизлияния в периокулярной соединительной ткани глаз, жабрах, у оснований плавников, на поверхности тела и иногда на голове. Брюшко увеличено (растянуто). При вскрытии в полости тела обнаруживают скопление прозрачного желтоватого (иногда кровянистого) экссудата, множественные петехиальные кровоизлияния в мускулатуре, перивисцеральной жировой ткани, на брюшине, стенках кишечника и плавательного пузыря, сердце и поверхности паренхиматозных органов (рис.2) Печень и почки гиперемированы, отечны, неравномерно окрашены, реже бледные. Желудочно-кишечный тракт свободен от пищи, иногда наполнен слизеподобным содержимым молочно-белого цвета.

 

 

Рисунок 2 – У радужной форели убойного возраста с острой формой VHS заметны обильные кровоизлияния в брюшной полости, стенках плавательного пузыря и мускулатуре (Фото: Пиа Веннерстрём, Evira).

 

Хроническая форма болезни сопровождается умеренной и более растянутой во времени гибелью рыб. Больные рыбы имеют почти черную окраску тела, сильно выраженное пучеглазие (как правило, двустороннее), беловато-серые жабры (рис. 3). Внешние кровоизлияния обычно отсутствуют. Координация движений погибающих рыб нередко нарушена. При вскрытии отмечают общую анемию органов. Печень бледная, с точечными кровоизлияниями, почки, сердце, стенка кишечника серо-белого цвета. В брюшной полости может содержаться небольшое количество экссудата.

 

Рисунок 3 – У рыбы, пережившей острую стадию VHS, наблюдаются сильная анемия (светлые жабры) и некроз печени. Кровоизлияния на данном этапе менее заметны. (Фото: Ханна Куукка-Анттила, Evira)

 

Нервная форма встречается редко и характеризуется поражением центральной нервной системы. Отмечают повышенный тонус скелетной мускулатуры рыб, внезапные спазматические подергивания тела. Реакция на внешние раздражители (звуковые сигналы, кормление) неадекватная: рыба начинает метаться у поверхности воды, пытаясь выскочить, плавает по кругу или штопорообразно. Приступы возбуждения чередуются с состоянием угнетения. Патологоанатомические изменения не выражены.

Профилактика и лечение: во избежание возникновения болезни, рыбы и икра, доставляемые в рыбное хозяйство, а также вода в водоисточнике должны быть свободными от вирусов. Эффективного способа лечения болезни пока еще не найдено. Вакцина находится в разработке уже долгое время, но в Европе она пока еще не продается. Единственный способ избавиться от VHS - уничтожить все поголовье рыб, произвести дезинфекцию помещений и оборудования, а также вызвать искусственный простой хозяйства, отказавшись от завоза рыбы в течение, по меньшей мере, 6 недель.

 

1.2 Инфекционный некроз гемопоэтической ткани, или IHN

Возбудитель: IHN (Infectious Haematopoietic Necrosis) вызывается рабдовирусом из рода Novirhabdovirus.

Устойчивость. Вирус быстро утрачивает свою активность в кислой среде (pH 3), при температуре 60°С за 30 минут, но при температуре 10°С и 4°С вирус живет свыше 36 недель. В пресной воде при температуре 15°С вирус живет 25 дней, а в соленой - около 12 дней. Хранение при температуре ниже -20°С не снижает вирулентности вируса.

Эпизоотология: болезнь встречается чаще всего у молоди радужной форели и других лососевых, обитающих в Тихом и в Атлантическом океанах. Случаи заболеваний также отмечены у кумжи, хариуса, трески, осетра, салаки и щуки. Эти виды не слишком восприимчивы к IHN, но, тем не менее, они могут служить ее переносчиками. Болезнь широко распространена во всем мире, в том числе в Северной Америке, Южной и Центральной Европе, на Дальнем Востоке и в Российской Карелии. В Финляндии болезнь не зафиксирована.

Течение и симптомы болезни: вирус IHN чрезвычайно губителен для молодых лососевых. Смертность может начаться сразу после выклева личинок и поражать поголовье вплоть до двухмесячного возраста. Взрослые особи погибают редко, но вирус передается рыбам всех возрастов, поэтому они могут выступать в качестве его переносчиков и распространителей. Смертность от болезни среди мальков составляет 80–90 %. У годовиков она редко превышает 20–30 %. Смертность начинается при температуре воды около 10°С, при температуре ниже 10°С болезнь становится менее острой и переходит в хроническую форму. При температуре выше 15°С степень пагубного воздействия болезни обычно снижается и болезнь быстро прекращается. Как правило, рыбы апатичны, хотя иногда у них могут отмечаться рывки и судорожное плавание, окраска темнеет, жабры светлеют и наблюдается пучеглазие. Кроме того, рыбы анемичны, живот у них распухает, а из ануса свисает светло-серая полоска фекалий. У основания плавников и на поверхности слизистых оболочек полости тела наблюдаются кровоизлияния. Кишечник и желудок увеличены и содержат слизь с кровью. Кровоизлияния отмечаются также в желточном мешке у только что вылупившихся личинок.

Распространение: выжившие после болезни рыбы могут оставаться носителями вируса. Вирус можно выделить из почки, селезенки, фекалий, мочи и половых продуктов. Таким образом, вирус может распространяться посредством прямого контакта, но также он передается через воду, половые продукты и фекалии. Пока что не установлено, может ли вирус передаваться вертикально (сохраняясь внутри икринок), то есть от матери к малькам, через продезинфицированную икру. На данный момент вертикальная передача считается редкой и маловероятной при условии грамотной дезинфекции. Даже продезинфицированную икру из хозяйства, в котором был зарегистрирован вирус IHN, нельзя перевозить на территории, свободные от вируса.

Профилактика и лечение: профилактика – единственный способ борьбы с этой болезнью. Возбудителя нельзя допускать в рыбоводное хозяйство вместе с рыбами, икрой, водой и инвентарем. Вирус невозможно уничтожить в организме больной рыбы. Для полного избавления от болезни рыбоводному хозяйству необходимо полностью обновить стадо рыб.

 

1.3 Инфекционный некроз поджелудочной железы, или IPN

Возбудитель: IPN (Infectious Pancreatic Necrosis) вызывается вирусом Aquabirna. Для вируса выделено семь различных генотипов (1-7), из которых генотипы 2, 3, 5, 6 и 7 были зарегистрированы в Европе. Большинство штаммов, найденных у лососевых в Европе, относятся к генотипам 2 и 5. Ранее штаммы IPN классифицировали серологически, выделяя десять серотипов (WB, Sp. Ab, He, Te, Can 1-3, Ja и TV-1). Штаммы серотипа Ab относятся к генотипу 2, а штаммы серотипа Sp - к генотипу 5.

Устойчивость. Вирус IPN хорошо выдерживает кислую среду (например, в пищеварительном тракте), сухость (около 2-х недель), мороз (свыше 2-х лет) и сохраняется в пресной и морской воде от нескольких недель до года.

Эпизоотология: вирусы группы Aquabirna выделены в разных частях света у многих видов водных животных – у различных видов рыб, моллюсков, брюхоногих, ракообразных (в том числе речных раков). Большинство этих организмов служат лишь переносчиками вируса, но сами не болеют. Во всем мире IPN-вирусом принято называть вирус, выделенный только у лососевых. Болезнью IPN называется исключительно заболевание лососевых рыб, вызванное вирусом IPN. В Финляндии болезнь IPN ежегодно регистрируется в приморских рыбоводных хозяйствах, а штаммы по большей части относятся к генотипам 2 и 5. Внутри страны IPN встречалась редко до 2012 года, когда в рыбоводных хозяйствах внутренних районов было зарегистрировано пять случаев заболеваний IPN. Выделенные штаммы относились к генотипу 2, и только в двух случаях у рыб были замечены незначительные симптомы и повреждения тканей, присущие болезни IPN. Смертность в этих случаях была весьма невысокой. Более ранние пробы, сделанные в приморских регионах, были взяты у бессимптомных рыб в ходе вирусологического исследования, и смертность не была зарегистрирована. Возраст рыб, чрезмерная плотность посадки, а также неблагоприятные условия содержания являются факторами развития болезни.

Течение и симптомы болезни: болезнь в острой форме обычно поражает мальков. Уровень смертности варьирует от нескольких процентов до 90 %, в зависимости от штамма IPN, вида рыбы и ее возраста. Восприимчивость к болезни снижается с возрастом: у молоди старше 3 месяцев болезнь приводит к смерти не так часто. Однако, в Норвегии после перемещения в море от IPN гибла даже 9-18 месячная молодь лосося, а уровень смертности превышал 10 %. Рыбы старшего возраста могут быть носителями болезни, но редко болеют IPN в острой форме. Болезнь может проявиться и в латентной форме, и, согласно некоторым источникам, при заражении рыб вирусом IPN у них снижается иммунитет к другим заболеваниям. Как правило, болезнь вспыхивает при температуре воды от 5 до 15 °C. Симптомами являются, в частности: потемнение тела, пучеглазие, кровоизлияния в основаниях плавников и поджелудочной железе, а также нарушение координации движений. Печень и селезенка бледные, живот и кишечник заполнены слизью. Рыба выглядит так, как будто проглотила небольшую горошину. При заражении вирусом IPN процент рыб, которые остаются носителями вируса, может варьировать от нескольких до почти ста процентов.

Распространение: важнейшими распространителями болезни IPN являются заболевшие рыбы, которые вместе с фекалиями выделяют вирус в воду. Вирус также распространяется с половыми продуктами, поскольку установлено, что он встраивается в икринку или ее оболочку, поэтому он и не разрушается под воздействием дезинфицирующего вещества. Кроме того, вирус встречается в молоках. Заражение может произойти также через инфицированную пищу. Экспериментально установлено, что, в частности, куры, совы, чайки и норки могут распространять вирус через фекалии. Вирус также хорошо распространяется через рыбоводное и рыболовное оборудование, наживку, транспортировочные емкости и инвентарь.

Профилактика и лечение: профилактика – самый надежный способ уберечься от потерь при IPN. Маточное стадо должно быть свободно от болезни, что необходимо подтвердить документально. Следует тщательно проводить дезинфекцию инвентаря и оборудования при контактах между морскими и пресноводными рыбоводными хозяйствами. От IPN существуют вакцины, но они предназначены в основном для предотвращения гибели молоди. Степень тяжести болезни варьирует в зависимости от условий содержания, вида рыбы и типа вируса. Для уничтожения возбудителя болезни на рыбоводном хозяйстве необходимо изъять все маточное стадо и после дезинфекции завезти на предприятие новое чистое стадо.