Исследование ферментативной

АКТИВНОСТИ СОКА ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

 

За сутки у человека выделяется 1,5–2,0 л панкреатического сока рН 7,8–8,5.

В состав панкреатического сока входят протеолитические (трипсиноген, химотрипсиноген, прокарбоксипептидазы А и В, проэластаза), липолитические (липаза, фосфолипаза А и эстераза), амилолитические (a-амилаза, мальтаза) ферменты и нуклеазы (рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза), расщепляющие белки, жиры, углеводы и нуклеиновые кислоты. Протеолитические ферменты секретируются в виде проэнзимов. Под влиянием энтерокиназы двенадцатиперстной кишки трипсиноген превращается в трипсин, который активирует и другие пропептидазы. Панкреатическая липаза активна в присутствии солей желчных кислот.

Для работы необходимы: водяная баня или термостат, спиртовка, штатив с пробирками, бюретки, сок поджелудочной железы, желчь, фибрин, крахмал – вареный и сырой, масло растительное, фенолфталеин, раствор Люголя, бромная вода (4%-ный раствор брома в воде), 0,01 н. раствор NаОН, стеклограф. Вместо сока поджелудочной железы можно использовать панкреатин (1 г растворяют в 250 мл 0,3%-ного раствора NаНСО₃), но активность его ферментов может быть ниже, чем у натурального сока поджелудочной железы.

Проведение работы. Нумеруют девять пробирок и в каждую наливают по 2 мл активированного поджелудочного сока (активацию поджелудочного сока в условиях лаборатории проводят добавлением к нему кишечного сока или соскоба слизистой оболочки кишечника). Затем в первую пробирку опускают кусочек фибрина; содержимое второй кипятят, охлаждают и опускают в нее кусочек фибрина; в третьей подкисляют поджелудочный сок соляной кислотой и добавляют кусочек фибрина; в четвертую добавляют 2 мл вареного крахмала; в пятую – щепотку сырого крахмала; поджелудочный сок в шестой пробирке кипятят, охлаждают и добавляют 2 мл вареного крахмала; в седьмую добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла; в восьмую – 2 мл растительного масла; поджелудочный сок в девятой кипятят и добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла. Все пробирки помещают на 30 мин в термостат или водяную баню при температуре 38–40 ^оС.

После прогревания пробирки охлаждают и проводят следующие реакции. К содержимому первых трех пробирок добавляют бромную воду, которая в присутствии аминокислот (триптофан) дает красновато-фиолетовое окрашивание; отсутствие окрашивания указывает на то, что фибрин не переваривается. В четвертую, пятую и шестую пробирки добавляют по 1–2 капли раствора Люголя и определяют присутствие крахмала. Амилолитические ферменты поджелудочного сока расщепляют вареный и сырой крахмал, но сырой крахмал расщепляется медленнее. Это можно установить, если пробирки с поджелудочным соком и крахмалом выдерживать в термостате по 10, 20 и 30 мин. Содержимое седьмой, восьмой и девятой пробирок титруют 0,01 н. раствором NаОН в присутствии индикатора фенолфталеина и по количеству раствора, затраченного на титрование каждой пробы, судят о липолитической активности поджелудочного сока.

Результаты работы и их оформление. Составьте таблицу и внесите в нее результаты опыта.

 

№ про-бирок	Содержимое пробирок	Время термостатирования, мин	Реактив	Результаты опыта
1	2	3	4	5
1	Сок поджелудочной железы + фибрин	30	Бромная вода
2	Прокипяченный сок подже-лудочной железы + фибрин	30	То же
Продолжение
1	2	3	4	5
3	Подкисленный сок поджелудочной железы + фибрин	30	То же
4	а) сок поджелудочной же-лезы + вареный крахмал; б) то же; в) то же	10   20 30	Раствор Люголя То же То же
5	а) сок поджелудочной же-лезы + сырой крахмал; б) то же; в) то же	10 20 30	Раствор Люголя То же То же
6	Прокипяченный сок поджелудочной железы + вареный крахмал	30
7	Сок поджелудочной железы + желчь + растительное масло	30	0,01 н. NаОН + фенолфталеин
8	Сок поджелудочной железы + растительное масло	30	То же
9	Прокипяченный сок поджелудочной железы + рас-тительное масло + желчь	30	То же

 

Проанализируйте результаты опыта и сделайте выводы о влиянии сока поджелудочной железы на белки, жиры и углеводы; о его ферментативной активности в различных экспериментальных условиях.

 

 

Р а б о т а  6

ВЛИЯНИЕ ЖЕЛЧИ НА ЖИРЫ

 

За сутки у человека отделяется 500–1500 мл желчи, одной из функций которой является эмульгирование жиров, делая водорастворимыми жирные кислоты.

Для работы необходимы: лупа, предметные стекла, штатив, пробирки, воронки, пипетки, свежая желчь, растительное масло, бумажные фильтры, вода.

Проведение работы. Влияние желчи на жиры можно наблюдать двумя способами:

1. На предметное стекло пипеткой наносят каплю воды и каплю желчи. К каждой капле добавляют небольшое количество растительного масла, перемешивают и рассматривают содержимое обеих капель под лупой.

2. Помещают в воронки бумажные фильтры и смачивают один водой, другой желчью. Устанавливают воронки в стоящие в штативе пробирки и в каждую воронку наливают по 10 мл растительного масла. Через 45 мин определяют количество профильтровавшегося жира в обеих пробирках.

Результаты работы и их оформление. Зарисуйте в тетрадь, как распределяется жир в капле воды и в капле желчи. Определите и запишите результаты фильтрации растительного масла через фильтры, смоченные водой и желчью. На основании полученных результатов объясните действие желчи на жиры.

 

 

Р а б о т а  7

РЕГИСТРАЦИЯ СОКРАЩЕНИЯ КИШКИ

У ЛЯГУШКИ

 

Двигательная функция кишки обеспечивает перемешивание и продвижение пищевых масс, создает лучшие условия для их ферментативного расщепления и всасывания продуктов переваривания. За счет активности наружных продольных и внутренних кольцевых мышц осуществляются несколько видов движений: маятникообразные, перистальтические, ритмическая сегментация. Все сокращения происходят на фоне общего тонуса стенок кишки.

Для работы необходимы: кимограф, регистрирующий рычажок с серфином, универсальный штатив, набор препаровальных инструментов, раствор адреналина (1:1000), раствор ацетилхолина (1:1000), 0,1%-ный раствор пилокарпина, 0,1%-ный раствор атропина, раствор Рингера.

Объект исследования – лягушка.

Проведение работы. У лягушки разрушают головной и спинной мозг и укрепляют ее на препаровальной пластинке. Вскрывают брюшную полость, препарируют заднюю кишку от клоаки до средней кишки. На универсальном штативе зажимом фиксируют препаровальную пластинку. В месте перехода тонкой средней кишки в толстую заднюю накладывают серфин и регистрируют исходное сокращение кишки (барабан кимографа должен вращаться очень медленно). После записи нормальных сокращений наносят на заднюю кишку 1–2 капли раствора ацетилхолина, который усиливает сокращение кишки. Затем наносят 1–2 капли раствора атропина, который блокирует действие ацетилхолина. Отмыв кишку раствором Рингера, регистрируют сокращение кишки при воздействии на нее раствора пилокарпина, усиливающего моторику кишки, и после повторного отмывания раствором Рингера наблюдают действие раствора адреналина, угнетающего двигательную активность.

Результаты работы и их оформление. Результаты регистрации вклейте в тетрадь. Стрелочками обозначьте на кимограмме воздействие различными веществами. Проанализируйте влияние медиаторов парасимпатических (ацетилхолина) и симпатических (адреналина) нервов, а также механизм действия пилокарпина и атропина на моторику задней кишки лягушки.

 

 

Р а б о т а  8