Б) Исследование окрашенных препаратов

Лабораторная диагностика венерических заболеваний.

Лабораторная диагностика сифилиса (люэса).

Возбудитель – бледная трепонема (семейство спирохетовых).

Она спиралевидной формы, с одинаковыми по высоте завитками и расстояниями между ними, по концам завитки немного ниже и расстояние между ними немного больше. Длина трепонемы от 4 до 16 мкм, поперечник от 0,2 до 0,35 мкм, количество завитков от 8 до 12.

Бледные трепонемы очень подвижны и обладают характерными движениями:

· Вращательным вокруг собственной оси (ротаторным)

· Поступательным (в одну сторону)

· Способностью сгибать своё тело в стороны наподобие маятника

· Контрактильным (волнообразным (как флаг на ветру флаг))

Возрастные и половые особенности: заболевание одинаково регистрируется как у мужчин, так и у женщин.

Материал для исследования: Бледную трепонему надо искать во всех элементах, подозрительных на сифилис – это эрозии, язвы, папулы, пятна, кандиломы. Помимо половых органов следует обращать внимание на слизистую оболочку полости рта и заднего прохода. Материалом для исследования служит тканевая жидкость из сифилитических элементов, пунктат лимфатических узлов, отделяемое половых органов.

Если проводилось местное лечение и трепонемы не найдены, то следует назначить примочку из изотонического раствора хлорида натрия, и на другой день повторить исследование.

Очень важно обнаружить трепонему в ранние сроки, чтобы вовремя начать лечение и предотвратить заражение других лиц.

Взятие материала для исследования.

Перед взятием материал поверхность язвы, эрозии тщательно освобождают от гноя и корочек ватным тампоном, пропитанным изотоническим раствором хлорида натрия, стараясь не травмировать поверхность язвы. Затем прокаленную и остуженную металлическую лопаточку или бактериологическую петлю осторожно прикладывают к поверхности язвы и раздражают её, стараясь получить тканевую жидкость из глубины язвы. Через некоторое время начинает выделяться прозрачный тканевой сок, который той же лопаточкой вносят в каплю изотонического раствора хлорида натрия на тонком предметном стекле, затем накрывают покровным стеклом. Если таким образом тканевой сок получить не удалось, то можно двумя пальцами или пинцетом зажать шанкр, стараясь сдавить его края, пока не появится сок. Из немацерированных влажных элементов материал получают путем скарификации скальпелем их поверхности.

При взятии материала с поражения на губах, необходимо избегать попадания слюна, так как в ней могут содержаться губные трепонемы.

При подозрении на врожденный сифилис у новорожденных рекомендуется скарифицировать слизистую внутренней поверхности пуповины.

При расположении язвы в труднодоступных местах, а также при нахождении большого количества вульгарных спирохет, которые трудно отличить от бледной трепонемы, производят пункцию регионарных лимфатических узлов.

Лабораторная диагностика заключается в микроскопическом исследовании на бледную трепонему и серологическом исследовании крови и ликвора.

1. Микроскопическое исследование:

А) Исследование нативного препарата.

Наилучшим методом исследования на бледную трепонему является исследование в свежем состоянии в тёмном поле зрения. Трепонемы легче удаётся найти благодаря их характерному движению, морфология их в живом виде наиболее характерна.

Предметное стекло должно быть не толще 1,1-1,2 мм, без царапин, совершенно чистым. Капля с исследуемым материалом не должна выходить за пределы покровного стекла.

В препарате видно большое количество мелких светящихся точек, отдельные лейкоциты, эпителиальные клетки, эритроциты, кровяные пластинки. Если эритроцитов много, поле становится слишком светлым, трепонемы видны хуже, поэтому при взятии материала надо избегать крови. Не следует смешивать с трепонемами нити фибрина – длинные, с большими завитками, производящими впечатление подвижных.

Бледная трепонема в тёмном поле зрения имеет вид нежной спирали, освещенной ровным светом, слабо блестит, тонкая. Движения её плавные, изредка она изгибается под углом, особенно характерно маятникообразное движение. Завитки равномерны по ширине, высота их несколько меньше по концам, верхушки закруглены.

Бледную трепонему следует отличать от Т. refringens и зубных трепонем.

Т. refringens – грубая, толстая, с неравномерными крупными завиткми и беспорядочными движениями.

Т. dentium трудно отличить от бледной трепонемы. Она короче, имеет 4-8 завитков, маятникообразные движения отсутствуют.

б) Исследование окрашенных препаратов.

Бледная трепонема слабо прокрашивается большинством красок, почему и получила название бледной. Практически единственным методом, который можно рекомендовать является исследование в тёмном поле зрения. Однако для некоторых целей приходится пользоваться окрашенными препаратами.

¨ Наилучший метод окраски – по Романовскому-Гимзе. Высушенный на воздухе препарат фиксируют в течение 10-15 минут в метиловом спирте или смеси Никифорова (поровну этиловый спирт с эфиром). На сухой зафиксированный мазок наливают раствор краски Романовского-Гимзы и оставляют на 30-60 минут. После окраски препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Значительно лучше препараты получаются если раствор краски налить под препарат. Для этого в чашку Петри кладут обломки спички, на них помещают стекло мазком вниз и наливают краску. При этом методе окраски бледная трепонема имеет нежно-розовый цвет, а другие трепонемы окрашиваются в более тёмный цвет с синим или фиолетовым оттенком.

¨ Наряду с этим существуют методы серебрения – серебрённые препараты не подлежат длительному хранению. Трепонемы при этом окрашены в коричневый или почти чёрный цвет, у них сохраняются морфологические особенности.

¨ Метод Бурри – на край предметного стекла наносят 1-2 капли туши и такое же количество тканевой жидкости из очага поражения.

2. Серологические исследования:

- Реакция Вассермана (RW)

- Реакции иммунофлюоресценции (РИФ, РИБТ и др.)