Приготовление реактивов

Ход реакции

Приготовление реактивов

1. 1% спиртовой раствор муцикармина (1 г муцикармина плюс 100 мл 50° С₂Н₅ОН).

Хранят в холодильнике. Перед употреблением краску разводят в 10 раз (1 часть краски на 9 частей дистиллированной воды).

2. Гематоксилин Эрлиха:

• гематоксилин - 2 г;

• 96° С₂Н₅ОН - 100 мл;

• дистиллированная вода - 100 мл;

• глицерин - 100 мл;

• калийные квасцы - 3 г;

• ледяная уксусная кислота - 10 мл.

При смешивании реактивов раствор приобретает светло-красный цвет. Созревает 14 дней в сосуде с широким горлом, на дно которого насыпают в избытке толченые калийные квасцы. Горло сосуда обвязывают марлей и ставят на свет. Перед употреблением краску фильтруют. Готовый раствор имеет ароматический запах и хромово-фиолетовый цвет.

1. Препарат фиксируют в метаноле 3 мин.

2. Опускают в эфир на несколько секунд, затем в 50° С₂Н₅ОН.

3. Заливают мазки раствором муцикармина на 10 мин 96° С₂Н₅ОН.

4. Промывают в дистиллированной воде.

5. Докрашивают гематоксилином Эрлиха - 5 мин.

6. Смывают краситель водопроводной водой.

7. Высушивают.

Значение реакции. Положительная реакция указывает на наличие в цитоплазме клеток слизи. Продукт реакции малинового цвета.

Окрашивание на гликоген (мукополисахариды) - PAS -реакция Реактивы:

метиловый спирт (СН₃ОН); йодная кислота;

фуксин основной для фуксинсернистой кислоты;

1N раствор HC1;

сернокислый натрий (Na₂S₂O₅);

активированный уголь;

гематоксилин;

йодноватокислый Na или K (NaJO₃ и KJO₃ соответственно); калийные квасцы; лимонная кислота.

1. 1N раствор HC1:

В мерную колбу на 1 л наливают 82,5 мл концентрированной соляной кислоты (HC1) и добавляют дистиллированную воду до метки. Хранят в холодильнике.

2. Реактив Шиффа:

1 г основного фуксина растворяют в 200 мл дистиллированной воды.

Кипятят в течение нескольких минут. Остужают раствор до 50°С. Фильтруют раствор. Добавляют 20 мл 1N HC1. Остужают.

Добавляют 1 г Na₂S₂O₅ (метабисульфит натрия). Добавляют активированный уголь (бесцветный). Когда раствор обесцвечивается (через сутки), он готов к употреблению. Хранят в холодильнике.

3. Сернистая вода. Готовят перед работой!

Смешивают 1 г Na₂S₂O₅, 200 мл дистиллированной воды и 10 мл 1N HC1.

4. Йодная кислота. Готовят перед работой!

Смешивают 200 мг йодной кислоты и 40 мл дистиллированной воды

5. Гематоксилин Эрлиха. Смешивают: гематоксилин - 1 г; NaJO₃ - 0,2 г; калийные квасцы - 50 г; лимонная кислота - 1 г; дистиллированная вода - 1 л.

Краска созревает 15 дней в сосуде, прикрытом бумажным колпачком, при частом взбалтывании. При хранении в хорошо закрытом сосуде раствор остается годным к использованию в течение длительного времени

6. Солянокислый спирт: смешивают 99 мл 70° С₂Н₅ОН и 1 мл концентрированной HC1.