Окраска бактерий в мазках

Ход реакции

Приготовление реактивов

Ход реакции

1. Препарат фиксируют в метаноле 20 мин.

2. Промывают проточной водой 15 мин.

3. Опускают в эфир на несколько секунд.

4. Промывают дистиллированной водой 20 мин.

5. Переносят в йодную кислоту на 3 мин.

6. Промывают дистиллированной водой 3 раза по 3 мин.

7. Помещают в реактив Шиффа на 40 мин (оставляют в темном месте).

8. Промывают сернистой водой 3 раза по 3 мин.

9. Промывают дистиллированной водой 3 мин.

10. Докрашивают гематоксилином 20 мин.

11. Промывают водопроводной водой.

12. Высушивают.

Значение реакции. Наиболее важное значение имеет реакция в гематологических исследованиях, для определения формы лейкоза. Гранулы гликогена окрашиваются в красный или вишнево-красный цвет. Ядра лейкоцитов синие или фиолетовые. При миелобластном лейкозе продукт реакции в бластах определяется в виде диффузного окрашивания или мелкой зернистости. При лимфобластном лейкозе - в виде крупных гранул. Однако реакция на гликоген используется и для уточнения гистологической формы в дифференциальной диагностике других злокачественных опухолей.

Реакция на пероксидазу Реактивы:

96° этиловый спирт (С₂Н₅ОН);

40% формалин;

3% перекись водорода (Н₂О₂);

бензидин.

1. «Спирт-формалин» - фиксатор:

Смешивают 9 частей 96°этилового спирта (С₂Н₅ОН) и 1 часть 40% формалина.

Хранят в холодильнике.

2. 40° этиловый спирт:

Смешивают 100 мл этилового спирта (С₂Н₅ОН) и 144,4 мл дистиллированной воды

Хранят в холодильнике.

3. Инкубационная среда (готовят перед работой!):

40° С₂Н₅ОН - 5-7 мл;

3% Н₂О₂ - 2 капли;

бензидин - несколько кристаллов.

Реактивы смешивают, полученный раствор фильтруют.

1. Препарат фиксируют в смеси «спирт-формалин» 30 с.

2. Опускают на несколько секунд в эфир.

3. Оставляют в инкубационной среде (в темном месте) на 15 мин при 22°С.

4. Промывают водопроводной водой.

5. Высушивают.

Значение реакции. Наиболее важное значение имеет реакция в гематологических исследованиях, для определения формы лейкоза.

Наличие пероксидазы характерно для клеток миелоидного ряда, продукт реакции - желто-коричневого цвета. При миелобластном лейкозе продукт реакции в бластах определяется в виде гранул. При лимфобластном лейкозе - в виде крупных гранул. Реакция на перок-сидазу используется также для выявления продукта реакции антиген-антитело при проведении иммуноцитохимических реакций.

В цитологической практике нередко возникает необходимость в окраске и исследовании бактерий. Это чаще всего касается мазков из шейки матки и других органов и тканей, различного рода экссудатов. Мазки готовят разными способами. В тех случаях, когда материал жидкий, наносят его каплю на чистое предметное стекло и размазывают, пользуясь краем другого предметного стекла (лучше шлифованного). Если материал очень густой (например, гной), то его либо разводят физиологическим раствором и тогда поступают, как в первом случае, либо размазывают тонким слоем по предметному стеклу при помощи петли или стеклянной палочки. Наконец, можно готовить мазки-отпечатки, для чего чистое предметное стекло прикладывают непосредственно к серозному покрову, слизистой оболочке или к свежей поверхности разреза какого-либо органа (ткани). При наличии жидкого содержимого (экссудат, моча и пр.) его рекомендуют центрифугировать и из осадка готовить мазки.

Полученные по одному из вышеуказанных способов мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно 70°C) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Можно фиксировать мазки и в 96° спирте (10-15 мин).

Фиксированные мазки сохраняются в течение какого угодно времени.

Окрашенные мазки исследуют с иммерсионным объективом. При желании заключают в бальзам: на окрашенный и хорошо высушенный мазок наносят каплю бальзама и помещают под покровное стекло.