Серологическая диагностика. Биопроба. Лабораторные животные к T.equigenitalis не чувствительны

Биопроба. Лабораторные животные к T.equigenitalis не чувствительны. В случае от­рицательного результата бактериологического исследования можно ис­пользовать биопробу на кобылах. Для ее постановки берут смегму у же­ребцов из уретральной ямки, уретры, препуция, пениса, у кобылы из клиторного синуса и ямки. Смегму разбавляют в 30 мл дистиллированной воды и ин окулируют при помощи осеменительной пипетки в матку кобы­ле. Если смегма содержит возбудитель, то через три дня его можно выде­лить из цервикальной или маточной слизи. Одновременно до заражения и после заражения (7-14-е сутки) у кобылы исследуют сыворотку крови на наличие антител в РСК и РА.

Болезнь сопровождается синтезом гуморальных и секреторных антител. В основном используют методы, основанные на обнаружении гуморальных антител.

В РСК и пробирочной РА антитела удается выявить на 7-14-е сутки после заражения, и они достигают максимума к 15-20-е суткам (РСК 1:16 1:512; РА 1:80-1:640), затем их уровень довольно быстро снижается, осо­бенно в РСК. Поэтому позитивные показания этих серологических реак­ций обычно совпадают с клиническими признаками болезни и могут помочь в уточнении этиологии воспаления гениталий. Лошадей-бактерионосите­лей при помощи РСК и РА, как правило, выявить не удается. В отдаленные сроки целесообразнее использовать более чувствительные серологические реакции (иммуноферментный метод, РНГА).

В России в соответствии с «Методическими указаниями по лаборатор­ной диагностике контагиозного метрита лошадей» (1984) для серологичес­кой диагностики болезни рекомендована пробирочная РА. В качестве ан­тигена применяют инактивированную формалином (0,25%) взвесь бакте­рий концентрацией 10 млрд.м.к. в 1 мл по оптическому стандарту мутнос­ти. РА ставят в объеме 1 мл, на 3%-ном растворе натрия хлорида (рН 7,2-7,4) в разведениях 1:20 и 1:40. Учет результатов проводят через 20-24 часа. Как положительный результат оценивают реакцию интенсивностью на три креста и более в разведении 1:40, сомнительный — на два креста в разведении 1:20 или на один-два креста в разведении 1:40.

При постановке РСК антиген готовят из 72-часовой культуры, выращен­ной на «шоколадном» агаре. Бактериальную массу смывают трис-буфером (рН 7,4), трижды отмывают центрифугированием, ресупендируют в буферном растворе и консервируют мертиолатом (1:10 000). Рабочее разведение антиге­на определяют в опыте титрации обычным способом. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Исследуемую сыворотку крови инактивируют при 56° С в течение 30 минут. Эритроциты барана берут в концентрации 1%.

Первую фазу РСК проводят при 4-5° С в течение 17 часов. После до­бавления индикаторной системы компоненты выдерживают в водяной бане при 37° С в течение 1 часа.