Культивирование. Для посева используют среду Хейфлик, Эдварда, ВИЭВ, УНИИЭВ, мартеновский бульон с 10-15% сыворотки крови крупного рогатого скота и 10% дрожжевого экстракта.
Жидкий исследуемый материал, а также гомогенат легочной ткани высевают на агаровые и бульонные среды. Можно делать посев на поверхность агаровой среды кусочками легочной ткани и лимфатических узлов. Целесообразно из жидкого материала (легочная лимфа, плевральная жидкость), тканевого гомогената (10%-ная взвесь в сердечно-мозговом бульоне) готовить последовательные десятикратные разведения и по 0,1 мл разведений 10-1-105 высевать на агаровую среду. Нередко из-за присутствия тканевых ингибиторов рост микоплазм получается в более высоких разведениях при отсутствии в малых. Посев материала в полужидкую среду Хейфлик с 0,15% агара увеличивает частоту выделения возбудителя. Посевы инкубируют при 37° С во влажной камере в аэробных условиях.
Рост возбудителя в жидких питательных средах обычно наблюдается через 3-7 суток в виде легкого помутнения, опалесценции, изменения цвета. С целью выявления колоний микоплазм из пробирок с признаками роста производят высев на агаровые среды. Посевы на агаровых средах начинают ежедневно просматривать через 48 часов инкубирования в течение 5-7 суток, используя стереоскопический микроскоп с увеличением х25-40. Колонии возбудителя имеют типичную для микоплазм форму «яичници-глазуньи» и диаметр 0,1-0,6 мм. На следующем этапе проводят идентификацию колоний микоплазм (или ахолеплазм), дифференцируя их от колоний классических бактерий или L-форм, используя методы, описанные выше, а также посев на среды без селективных факторов. Чистые культуры микоплазм отвивают на жидкую питательную среду и поддерживают путем субкультивирования с интервалом 7 суток.
|
|
Идентификация культуры возбудителя. Идентификацию обычно осуществляют серологическими методами: окраска колоний на агаре при помощи референтных флуоресцирующих антисывороток, в тестах ингибиции роста и метаболизма — с диагностическими сыворотками, а также исследуют ферментативную активность выделенных культур. Для
М. туcoides subsp. mycoides характерна чувствительность к дигитонину, способность к ферментации глюкозы, редукции тетразолия натрия в аэробных и анаэробных условиях, разжижению сы воротки в аэробных условиях при слабой про геолитической активности в анаэробных условиях, инертность по отношению к аргинину и отсутствие фосфатазы (табл. 94).