Выделение и идентификация культур возбудителей. Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование

При респираторной патологии материал берут влажными тампонами из глубины носовых ходов, с миндалин. Посмертно берут аналогичным спо­собом материал из трахеи, бронхов, а также кусочки легочной ткани. Ма­териал замораживают и транспортируют. В случае генитальной патологии у коров для исследования берут тампонами мазки из вульвы, так как в матке микоплазмы обнаруживаются редко, при наличии аборта — котиле­доны, карункулы, амниотическую жидкость, кусочки легких, у быков — препуциальную слизь, сперму. При подозрении на микоплазмозный мастит для исследования с соблюдением асептики отбирают пробы молока. Там­поны помещают в транспортные среды Amies или Stuart, тканевый матери­ал, сперму, молоко транспортируют в замороженном виде.

Культивирование. Материал, взятый при респираторной патологии, в максимально сжатые сроки после поступления высевают на плотные среды Фрисс и Хейфлик. Па­раллельно материал засевают на аналогичные жидкие питательные среды. Материал, взятый тампонами, а также трахеальные и бронхиальные смывы засевают в бульон в трех разведениях
(10¹ -10³), легочный гомогенат раз­водят до 10⁹. Посевы инкубируют при 37° С в СО₂-инкубаторах при высокой влажности. Бульонные посевы через 2-3 дня культивирования высевают на агаровые среды с последующей отвивкой выросших колоний на жидкие сре­ды. М. dispar лучше растет на жидких средах, при изоляции этого вида микоплазм до высева на плотные среды целесообразно провести несколько пас­сажей на жидких средах. У больных животных в материале доминируют па­тогенные микоплазмы, у здоровых животных преобладает смешанная микоплазменная микрофлора.

Материал, взятый из репродуктивных органов для изоляции уреаплазм, высевают на уреаплазменный агар и бульон. Крупные кусочки тканей об­жигают в спирте, разрезают и засевают штрихом на агаровую среду, мел­кие измельчают в нескольких миллилитрах бульона, оставляют на 5 минут, затем из надосадочной жидкости делают пять десятикратных разведений и засевают на агаровую среду. Из материала, взятого тампонами, делают 5-7 десятикратных разведений, которые высевают на уреаплазменный агар и бульон. Часть посевов инкубируют при 37°С в аэробных, другую — в анаэробных условиях в атмосфере Н₂ и СО₂. Наличие роста уреаплазм в бульоне устанавливают по защелочению рН в течение 1-7 суток инкуби­рования, при наличии которого производят высевы на агаровую среду. Следует иметь в виду, что защелочение среды может быть вызвано не толь­ко уреаплазмами. Посевы на агаре исследуют на наличие колоний в тече­ние 2-10 суток инкубирования.

При исследовании на микоплазмозные маститы образцы молока лучше высевать на агаровую среду Хейфлик.