Микроскопическое исследование исходного материала. Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование

При подозрении на инфекции М. agalactiae, M. capricolum для исследова­ния берут пробы молока, синовиальную жидкость. От павших и убитых животных отбирают часть печени, селезенку, почку, регионарные лимфа­тические узлы, пораженную часть вымени, суставную жидкость, поражен­ный глаз. Пробы молока отбирают асептически, после сдаивания первых порций молока. Синовиальную жидкость получают путем пункции сустава при помощи стерильного шприца.

При поражении органов дыхания в лабораторию направляют части легких, экссудат грудной полости, регионарные легким лимфатичес­кие узлы, части печени, селезенки, пораженные глаза, пробы молока.

Во всех случаях при поражениях репродуктивного тракта берут пробы вагинальной слизи, органов зрения — конъюнктивальную жидкость.

Материал доставляют в лабораторию в термосе со льдом или в замо­роженном виде. В последнем случае допускается хранение материала в течение нескольких суток («Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной агалактии овец и коз», 1984; «Методические указания по лабораторной диагностике инфекционной плевропневмонии коз», 1984).

Для прямого обнаружения микоплазм в мазках-отпечатках из органов, плев­ральной, суставной жидкости при диагностике контагиозной плевропнев­монии коз, инфекционной агалактии овец и коз и других микоплазмозов используют окраску по Романовского-Гимза. Препараты фиксируют 15 -20 минут этанолом или 5 минут метанолом. Окрашивают краской Романовскому-Гимза (1:10), подогретой до 90°С в течение 20 минут или при комнат­ной температуре в течение 24 часов. Микоплазмы обнаруживаются в виде мелких полиморфных кокковидных, нитевидных, кольцевидных структур розового цвета. В препаратах, окрашенных по Граму, микоплазмы обычно выявить не удается.

Для подтверждения микоплазмозной этиологии наблюдаемых масти­тов микоплазмы в молоке обнаруживают окраской акридиновым оранжевым. Готовят 0,01%-ный раствор акридинового оранжевого в фосфатно-цитратном буфере (рН 3,0). Краситель можно хранить при 4° С до 6 месяцев. Исследуемое молоко центрифугируют 5 минут при 1000 g, смешивают равные объемы раствора красителя и молока, остав­ляют на 5 минут. Затем 10 микролитров смеси помещают на агаровую поверхность и накрывают покровным стеклом. Препарат исследуют под микроскопом как при методе эпифлуоресценции. Микоплазмы имеют яр­кий зеленый цвет, обычно выглядят округлыми или слегка удлиненными. Классические бактериальные клетки также флуоресцируют, но слабее; клетки имеют иную морфологию и взаимное расположение.