Изоэлектрические точки некоторых белков

Комплексные белки

Клетка содержит тысячи различных типов белков. Выделение индивидуальных белков важно для изучения их состава, свойств, установления аминокислотной последовательности. Существует множество методов выделения и очистки белков, установления их состава, строения, структуры, свойств.

Методы очистки гипотетического фермента.

Наряду с хроматографией другим важным методом, пригодным для разделения белков, является электрофорез, основанный на перемещении заряженных белков в электрическом поле.

Электрофоретическая подвижность белка (m) пропорциональна заряду молекулы, Z, деленному на коэффициент трения, f, т. е. m = Z/f, причем коэффициент трения связан с молекулярной массой и формой биополимера.

Для определения изоэлектрической точки (рI) белка используют метод изоэлектрического фокусирования. Градиент рН устанавливают с помощью смеси низкомолекулярных органических кислот и оснований.

Взаимодействие антитело-антиген используют для качественного определения белков, установления места их локализации. Антитела есть Y -образные белки (иммуноглобулины), состоящие из 4 полипептидных цепей..При этом в процедуре определения могут быть использованы как поликлональные, так и моноклональные антитела, последние синтезируются популяцией идентичных антител (клон). Моноклональные тела столь специфичны, что могут различить два белка, отличающихся только одной аминокислотой.

Функция белка зависит от его аминокислотной последовательности, называемой первичной структурой белка. Человек производит до 40000 различных белков, каждый тип белка имеет уникальную структуру. В человеческой популяции аминокислотная последовательность белков не строго фиксирована, имеются некоторые вариации в составе, которые практически не оказывают влияние на функции белка.

Существует ряд приемов определения аминокислотной последовательности белка, наиболее распространен метод Эдмана - пошаговой деградации белка (секвинация). Большие белки предварительно разделяют на малые фрагменты (разрушение дисульфидных связей, направленная фрагментация полипептидной цепи).

Аминокислотная последовательность может быть выведена, если известна последовательность ДНК.

Вопросы для самоконтроля

1. Молекулярные массы белков крови.

2. Размеры молекул белков.

3. Чем определяется суммарный электрический заряд молекул белков?

4. Изоэлектрические точки наиболее распространенных белков.

5. Методы очистки белков.

6. Определение аминокислотной последовательности белков.