Работа № 3. Определение содержания гемоглобина в крови цианметгемоглобиновым методом по Драбкину

Принцип метода. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль), образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колометрически.

Ход работы. В пробирку (опыт) (осторожно!) отмерить 5 мл. трансформирующего раствора (реактив Драпкина), к нему добавить 0,02 мл крови (разведена в 251 раз). В другую пробирку (стандарт) прилить 5 мл реактива Драпкина и 0,02 мл стандартного раствора. Содержимое обеих пробирок перемешать и в течение 30 минут выдержать при комнатной температуре. Измерить экстинцию опытной и стандартной проб на ФЭКэ при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор).

Расчет содержания гемоглобина произвести по формуле:

Hb(г/л)=Е_оп/Е_ст ×С × К × 0,01, где

Е_оп – экстинкция опытной пробы;

Е_ст – экстинкция стандартного раствора;

С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг/100мл);

К – коэффициент разведения крови (251);

0,01 – коэффициент пересчета мг/100 мл в г/л.

Сопоставить с нормой содержания у здоровых людей и сделать вывод.

У здоровых людей концентрация гемоглобина колеблется в следующих пределах:

- новорожденные – 210 – 225 г/л;

- дети в возрасте 1 месяца – 145 - 165 г/л;

- дети в возрасте 6 месяцев – 115 - 130 г/л;

- дети в возрасте 1 года – 110 - 120 г/л;

- дети в возрасте 14-15 лет – 130 -150г/л;

- взрослые женщины – 120 - 140 г/л, мужчины – 135 - 160г/л.

Клинико-диагностическое значение определения содержания гемоглобина в крови: снижение содержания гемоглобина в крови наблюдается при анемиях различного генеза, при острых и хронических кровотечениях, некоторых инфекционных заболеваниях; повышение – при сгущении крови, при заболеваниях, связанных с увеличением количества эритроцитов (эритремии) и др.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. 1. 1. – б; 1.2. - б, в, г.

Вид 2. 2.1. 1-б; 2-а; 3-б; 4-в; 5-а; 6-г;

2.2. 1-а, в; 2-а; 3-а, б; 4-в; 5-а, б; 6-а, б.

Вид 3. 3.1. а-5, б-2, в-2, г-3, д-3, е-4; 3.2. 3→4→1→2→5.

Вид 4. 4.1. А (+, +, +); Д (-, +, -).