Работа 23. Определение жизнеспособности пыльцы по Диакону П

О жизнеспособности пыльцы в данном методе судят по действию активного дыхательного фермента цикла Кребса - сукцинатдегидрогеназы. Бесцветный раствор 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида восстанавливается в присутствии фермента в формазан ярко-красного цвета. Погибшая пыльца окрашивания не дает.

Поскольку пыльца растений очень чувствительна к воздействующим факторам среды, данный тест может служить оценкой вредного влияния условий на растения.

ХОД РАБОТЫ

Готовится фосфатный буфер Серенсена (рН=7,17); для его получения смешивают 70 мл 1/15 раствор Na₂HPO₄×2H₂O и 30 мл 1/15 М раствора КН₂РО₄.

На фосфатном буфере готовят 0,5%-ный раствор 2,3,5-трифенилтетразолий хлорида. В 1-2 капли данного реактива на предметном стекле помещают исследуемую пыльцу. Равномерно распределив ее на предметное стекло накрывают покровным и переносят в термостат при t=37°C на 30 минут.

Рассматривают по 5 полей зрения в каждом из 3-5 препаратов. Живые зерна пыльцы окрашиваются. Таким методом можно получить отчетливые результаты со многими сельскохозяйственными культурами.

Пыльца многих (но не всех) растений долго хранится в сухом состоянии при t=10°C. У некоторых растений пыльца мало жизнеспособна и ее следует использовать в первые дни после сбора. Предложенную методику можно сравнить с методом определения жизнеспособности пыльцы по Шардакову, а еще лучше путем прямого проращивания пыльцы в искусственной среде агар-агаром и 10%-ной сахарозой в кольцевой камере.

МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

1) пыльца растений; 2) буферный раствор Серенсена; 3) микроскоп; 4) предметные и покровные стекла; 5) 2,3,5-тетразолийхлорид; 6) термостат.