Вопрос 6(7) биотехнология

Наиболее широко используют рекомендованный ГФ метод диффузии в агар, заключающийся в сравнении действия определенных концентраций испытуемого и стандартного образца антибиотика на тест-микроорганизм.

Величину биологической активности антибиотиков выражают в условных единицах, содержащихся в 1 мл (ед/мл) или в 1 мг (ед/мг) препарата. За единицу антибиотической активности принято минимальное количество антибиотика, способное подавить развитие или задержать рост определенного числа клеток стандартного штамма тест-микроба в единице объема питательной среды

Расчет биологической активности производят по стандартной кривой, предварительно построенной на основании результатов определения пяти концентраций стандартного препарата. Умножением полученной концентрации (ЕД/мл) на степень разведения вычис­ляют активность (содержание ЕД) антибиотика в 1 мг препарата. Точность определений колеблется от 5 до 25 %.

К ускоренным микробиологическим методам относят методы, основанные на подавле­нии изменений рН питательной среды в процессе роста тест-микроорганизмов. Концен­трацию определяют сравнением изменений рН в средах испытуемых в стандартных об­разцах через 1,5 ч после начала инкубации. На этом принципе основан так называемый уреазный метод, заключающийся в наблюдении за изменением рН жидкой питатель­ной среды, содержащей 2% мочевины. Выделяющийся в процессе роста микроорганизма аммиак вызывает изменение рН среды. Точность определений около 46%.

Ферментативный метод основан на инактивации аминогликозидов в крови спе­цифическими ферментами (аденилтрансфераза и ацетилтрансфераза), продуцируемыми грамотрицательными микроорганизмами, устойчивыми к антибиотикам этой группы. Они являются источни­ком радиоактивности. Затем способом подсчета радиоактивности делают заключение о концентрации антибиотика. Определение занимает 1-2 ч.

Радиоиммунный метод основан на сравнительной оценке конкуренции анти­биотика, меченного тритием, и испытуемого антибиотика по отношению к специфиче­ским антителам иммунной сыворотки. Метод отличается очень высокой чувствительно­стью (0,003-0,01 мкг/мл), результаты получают в течение 1-2 ч, точность высокая (коэф­фициент вариации 4-5%).

Билет 8