Подготовка предметных и покровных стекол

Предметные и покровные стекла, употребляемые для приго­товления препаратов, должны быть чистыми и хорошо обезжирен­ными. Это может быть достигнуто разными способами. Стекла кипятят 15 мин в 1% растворе соды (или мыльной воде), спо­ласкивают водой, кладут в слабую хлористоводородную кислоту и хорошо промывают водой. Или же сначала выдерживают стекла 2 ч в концентрированной серной кислоте, затем моют их в воде, кипятят в щелочи, вновь промывают водой. Стекла можно также обрабатывать жидкостью следующего состава (по Цетт­нову): Kalii bichromici 20 г, Acidi sulfurici crudi 20 г, воды 200 мл. После 10 мин кипячения в этой смеси стекла про­мывают 5 мин в слабом растворе щелочи, а затем промывают во­дой и, наконец, спиртом. Хранят стекла в сосудах (банках) с притертыми пробками в смеси равных количеств спирта и эфира или в 96% спирте, либо промытыми и вытертыми досуха.

Исследование микроорганизмов в живом состоянии

Исследование микроорганизмов в живом состоянии применя­ется главным образом для изучения формы и подвижности бакте­рий, реже при реакции агглютинации. Для этих целей готовят препараты “раздавленная капля” и “висячая капля” (рис. 5).

Препарат “раздавленная капля”. При приготовлении «раздавленной» капли жидкость с исследуемым материалом наносят на пред­метное стекло и сверху накладывают покровное. Капли мате­риала надо брать такой величины, чтобы они заполняли все пространство между покровным и предметным стеклом и не вы­ступали за края покровного.

Препарат “висячая капля”. Для "висячей" капли необходимо иметь предметное стекло с луночкой. На покровное стекло предварительно наносят каплю жидкости с исследуемой культурой микроорганизмов. Затем на по­кровное стекло накладывают предметное стекло, с луночкой посередине, края которой предварительно смазаны вазелином. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в резуль­тате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат пере­вертывают покровным стеклом кверху. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

Для предотвращения быстрого высыхания препараты рекомендуется помещать во влажную камеру (чашку Петри), на дно которой положено 2-3 влажных кружка фильтровальной бу­маги, покрытых двумя сухими.

При изучении препаратов «раздавленная» и «висячая капля» под световым мик­роскопом край капли сначала отыскивают со слабым увеличением и при суженой диафрагме, а потом исследуют препарат при по­мощи более сильного увеличения. Более удобными для их микроскопического изучения представляются такие виды микроскопии, как темнопольная, фазово-контрастная и аноптральная.

Препараты фиксированных окрашенных клеток. Приготовление мазка и фиксация препарата

Исследование бактерий в окрашенном препарате дает воз­можность не только изучить их морфологию, но и получить представление о некоторых деталях их химического строения. Это достигается применением специальных методов.

Техника приготовления препаратов. В зависимости от характера исследуемого материала при его заборе используют бактериологическую петлю, пастеровскую пипетку или иглу. Петлю делают из платиновой или нихромовой нити длиной 5-6 см, закрепляют в петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки сгибают в виде плотно замкнутой петли размером 1x1,5 или 2x3 мм. Петлю держат как карандаш. Рабочую часть петли прожигают в пламени горелки в вертикальном положении, сначала конец петли, затем постепенно всю металлическую часть. Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой микроорганизмов держат между указательным и большим пальцами левой руки. Бактериологическую петлю берут правой рукой и прожигают ее в пламени горелки. Не выпуская петли из правой руки, мизинцем прижимают пробку к ладони и вынимают из пробирки. Во время манипуляции с пробиркой пробка находится в руке. Прожигают пробку и горло пробирки в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки, чтобы горячая петля не убила выросшую культуру. Захватывают петлей культуру и выводят ее из пробирки, не касаясь стенок. Держа петлю с культурой, закрывают пробирку пробкой над пламенем горелки. Ставят пробирку в штатив. Из жидких культур ка­плю материала наносят на предметное стекло бактериальной петлей и равномерно распределяют по центру предметного стекла. Из культуры микроорганизмов на плотной среде бактериальной петлей делают забор микробной массы и размешивают в заранее нанесенной на предметное стекло капле водопроводной воды. Остатки культуры на петле, сжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым и небольшим. Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре.