1. Приготовление мазков и окраска культур кокковых и палочковидных бактерий простым методом.
2. Окраска смеси бактерий по Граму в модификации Синева.
3. Окраска спор Bacillus subtilis по методу Ожешко.
4. Приготовление негативного препарата по Бурри-Гинсу из капсульной культуры Klebsiella pneumoniae.
5. Изучение подвижности Еscherichia coli и Bacillus subtilis методом темнопольной микроскопии в препаратах “раздавленная” и “висячая капля”.
6. Окраска культуры дрожжеподобного гриба Candida albicans метиленовым синим.
7. Микроскопическое исследование плесневых грибов аспергилла, пеницилла и мукора в растворе едкого кали и в смеси глицерина со спиртом.
8. Изучение музейных макроколоний патогенных грибов.
9. Изучение демонстрационных препаратов возбудителей протозойных инфекций: лейшманиоза, трипаносомоза, лямблиоза, трихомониаза, амебиаза. малярии, токсоплазмоза.
10. Изучение риккетсий в демонстрационных препаратах по Здродовскому.
11. Микроскопическое изучение в демонстрационных препаратах элементарных телец Пашена и внутриклеточных включений Гварньери и Бабеша-Негри.
РАЗДЕЛ: “ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ”
Тема: Питание бактерий. Культивирование бактерий. Искусственные питательные среды.
Цель: Охарактеризовать принципы культивирования бактерий.
Вопросы для самоподготовки
1. Химический состав микробной клетки.
2. Роль минеральных веществ и факторов роста в жизнедеятельности микроорганизмов.
3. Способы питания бактерий.
4. Механизмы питания бактерий.
5. Основные группы питательных сред, их состав и назначение.
6. Требования, предъявления к питательным средствам.
7. Понятие о чистой культуре микроорганизмов и методы выделения.
8. Выделение чистых культур аэробных бактерий (1 этап).
Литература
3. Дикий И.Л., Холупяк И.Ю., Шевелева Н.Е., Стегний М.Ю. Микробиология. – Х.: Прапор, Издательство УкрФА, 1999. – С. 50-56.
4. Н.П.Елинов, Н.А.Заикина, И.П.Соколова. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 36-45.
Питательные среды служат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов и изучения их свойств.
Питательные среды являются основой бактериологических работ, нередко определяя своим качеством результаты исследования
В состав сред, применяемых для выращивания бактерий, входят необходимые для построения их структуры органогены: азот, углерод, кислород, неорганические соединения, содержащие фосфор, серу, натрий, магний, железо, микроэлементы: кобальт, йод, марганец, бор, медь и др.
Все неорганические элементы должны находится в питательной среде в удобоусвояемом для данного микроорганизма соединениях. Потребность в кислороде и водороде бактерии удовлетворяют за счёт поступающей в клетки воды.
По характеру усвоения азота патогенные микроорганизмы делятся следующим образом: одни из них извлекают его из простых аммонийных соединений, другие нуждаются в аминокислотах, третьи расщепляют высокомолекулярные вещества –пептоны, представляющие собой продукты ферментации белков. Облигатные паразиты размножаются только в присутствии нативного т.е. неизменяемого белка.
Потребность бактерий в неорганических элементах удовлетворяются прибавлением к питательной среде NaCl, KH2PO2, K2HPO4 и т.д. Микроэлементы, выполняющие роль катализаторов химических процессов, поступают в питательную среду с пептоном, неорганическими солями и водой.
Кроме того бактерии нуждаются в ростовых факторах, которые по своей роли соответствуют витаминам для животных. Источником факторов роста, являются прибавляемые к питательной среде продукты растительного и животного происхождения, содержащие в своём составе никотиновую, парабензойную кислоты, витамины А, В, С и др.
Ряд микробов в процессе жизнедеятельности вырабатывают кислоты, сдвигающие РН в кислую сторону, вследствие чего может прекратится их рост. Поэтому к питательным средам добавляют, так называемые, буфер-вещества, сохраняющие установленную реакцию среды (например, фосфорнокислые соли).
Правильный подбор состава среды обеспечивает возможность выделения микроорганизмов из мест их обитания, получения чистых культур, изучения их морфологии и биохимических особенностей, способствует быстрой и правильной диагностике инфекционных заболеваний, дает возможность получить биомассу полезных для народного хозяйства микроорганизмов. Питательные среды не могут быть универсальными для всех видов микробов, так как микроорганизмы обладают индивидуальными особенностями питания и проявляют свои характерные физиологические свойства в определённых условиях обмена. Поэтому на практике пользуются разнообразными питательными средами, применительно к тому или иному виду микробов.