Методы, основанные на реакции преципитации

Основная модель реакции антиген-антитело представлена преципитацией, в ходе которой антиген из раствора осаждается специфическими антителами. Комплекс антиген-антитело выпадает в осадок только при определенных соотношениях концентраций реагирующих молекул. Область этих соотношений, при которых в надосадочной жидкости после образования преципитата не обнаруживаются ни свободные антигены, ни свободные антитела, называется зоной эквивалентности. Вне этой зоны, когда существует избыток антител или антигена, феномен преципитации не развивается, так как образуется растворимый комплекс антиген-антитело. Если в пробы с постоянной концентрацией антител добавлять возрастающие количества антигена и в образовавшихся, отмытых физиологическим раствором преципитатах определять содержание азота микрометодом Къельдаля, можно получить количественное выражение реакции преципитации. В зависимости от вариантов постановки преципитации выявляемое количество антител колеблется от 2 до 18 мкг азота белка антител в 2 мл.

Существуют различные модификации постановки реакции преципитации. Самый простой способ – кольцепреципитация.

Методика. В узкую пробирку (диаметр 0,5 см) наливают 0,3-0,5 мл неразведенной преципитирующей сыворотки. Пастеровской пипеткой медленно наслаивают по стенке (пробирку держат в наклонном положении) антиген в таком же объеме. Затем пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При правильном наслоении антигена на сыворотку четко видна граница между двумя слоями жидкости. РП должна обязательно сопровождаться контролями сыворотки и антигена (рис.8.1)

Результаты реакции учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1-2 ч или через 20-24 ч. В случае положительной реакции в опытной пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.

Реакция преципитации широко применяется в лабораторной практике для диагностики инфекционных заболеваний бактериальной этиологии (сибирская язва, чума, острая респираторная инфекция и др.).

В судебной медицине РП используется для определения видовой принадлежности белка (кровавых пятен, спермы и т.д.).

С помощью РП можно выявить не только видовую, но и групповую специфичность белка. С ее помощью, например, была определена степень родства различных видов животных и растений.

Применение РП для санитарно-гигиенического контроля пищевых продуктов позволяет выявить фальсификацию мясных, рыбных, мучных изделий, примеси в молоке и т.д.

Реакция преципитации может быть поставлена в агаровом геле (иммунодиффузия). Различают простую и двойную иммунодиффузию. В первом случае диффундирует один компонент реакции, во втором оба. В зависимости от того происходит ли диффузия по одной общей оси, во все стороны радиально или под углом иммунодиффузия называется линейной, радиальной или угловой. Общая схема методов представлена на рис. 2.