Процесс получения гибридом

1. Иммунизация животного соответствующим антигеном, который, как правило, имеет многофакторные антигенные, |.иммуногенные и гаптенные свойства.

2. Через три-четыре дня после иммунизации у мышей из селезенки выделяют субпопуляции В-лимфоцитов, соответственно {реагирующие антителообразованием на каждый компонент комплексного антигена.

3. Выделяют В-лимфоциты, ответственные за продукцию протективно активной части антигена, и суспендируют их с клетками плазмоцитомы миеломных мышей BALB/c при наличии полиэтиленгликоля (ПЭГ), 1000—4000 в концентрации 35—50 % или в присутствии вируса Сендай. ПЭГ растворяет мембраны клеток, что приводит к появлению гибридов опухолевых клеток и лимфоцитов иммунизированных мышей. Смесь клеток отмывают и инкубируют на среде, содержащей гипоксантин и тимидин. При этом выживают только гибридные клетки.

4. Спустя пять—семь дней среду меняют, а затем через такой же период супернатант растущей культуры проверяют на способность гибридом синтезировать специфические антитела и на активность синтеза. Антиген иммобилизуют на пленках или пластинках и обрабатывают культуральной жидкостью. Эффект соединения антигена и антитела учитывают внесением меченой радиоактивной, ферментной или флюоресцентной метки в составе антиглобулиновой сыворотки.

5. Клонирование. Гибридные клетки переносят на питательную среду, где они размножаются и образуют клон клеток-потомков одной гибридомы.

6. Клонированные гибридомы проверяют на способность синтезировать антитела и на продуктивность. Отобранные гибридомы хранят при минус 70 ºС.

7. Для получения моноклональных антител гибридные клетки размножают путем выращивания на питательных средах или вводя в брюшную полость гистосовместимых мышей, предварительно стимулированных на активизацию роста гибридомных клеток.

Достоинства данного метода:

1. Возможность получения индивидуальных и двойных гибридом. Последние представляют большую ценность для иммунохимических и диагностических исследований.

2. Выраженная масштабность получения. Моноклональные антитела могут быть синтезированы в неограниченном количест­ве против любых антигенных субстанций в титрах 1:10⁸ (10 мг антител/мл).

3. Гибридизация позволяет получать Моноклональные анти­тела при иммунизации неочищенным антигеном.

4. Возможность получения моноклональных антител к опухо­левым антигенам с реальной перспективой их использования для лечения злокачественных новообразований.

5. Применение в клинике моноклональных антител для ингибиции субпопуляции Т-лимфоцитов, отторгающих трансплантат.

6. Созданы гибриды миелом мышей и лимфоцитов человека, имеются сообщения о получении человеческих гибридом, в час­тности, к интерлейкину, что позволяет выделять его в очищенном виде.

7. Применение для таксономических целей, изучения бакте­риофагов и борьбы с бактериофагией в условиях микробиологичес­кой промышленности.

8. Возможность получения большого количества функциональ­но иммунокомпетентных клеток и их продуктов.

9. Использование антиидиотипических моноклональных ан­тител в качестве вакцинных препаратов.