Лабораторная работа № 2

Приготовление нативных препаратов микроорганизмов для микроскопирования.

Теоретические пояснения:

Для работы с микроорганизмами используют бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях. Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки с культурой микроорганизмов фламбируются. Если в работе используются суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, они берутся предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается. С этой целью промытые и высушенные стекла натирают хозяйственным мылом, увлажняют дыханием и протирают салфеткой. При микроскопировании можно использовать культуры, выращенные в жидких средах. Культуры, выращенные на твердых средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или какого-нибудь раствора до слабого помутнения. В зависимости от цели исследования готовят прижизненные или фиксированные препараты.

Цель работы: изучить методы приготовления прижизненных микропрепаратов (раздавленная капля, висячая капля).

Материалы и оборудование: Предметные и покровные стёкла, предметные стёкла с углублениями, микробиологические петли, пипетки, культура микроорганизмов в пробирке, микроскопы, иммерсионное масло.

Ход работы:

1. Приготовить нативный микропрепарат методом раздавленной капли.

- приготовить предметное и покровное стекла и зажечь спиртовку;

- взять пробирку со стерильной водой в левую руку и поместить её наклонно между большим и указательным пальцем на расстоянии 3–5 см от пламени;

- в правую руку взять петлю, простерилизовать ее в пламени спиртовки, включая часть петледержателя, которая при работе помещается в пробирку;

- мизинцем правой руки зажать пробку пробирки, повернуть, вынуть ее и держать, не касаясь окружающих предметов;

- обжечь края пробирки и взять петлей каплю воды, поместить её на предметное стекло;

- обжечь края пробирки и пробку, закрыть пробирку и поставить в штатив;

- прожечь петлю;

- открыть пробирку с культурой так же, как в п. 4;

- стерильную петлю ввести в пробирку с культурой, охладить, прикоснувшись к внутренней поверхности пробирки, а затем взять ею небольшое количество микроорганизмов;

- петлей с микроорганизмами сделать штрих на стекле внутри капли воды. После этого петлю прожечь и охладить, прикоснувшись к стеклу;

- растереть штрих петлей круговыми движениями, чтобы получилась слегка опалесцирущая суспензия и накрыть покровным стеклом. Чтобы не образовывалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его.

2. Приготовить микропрепарат методом висячей капли.

- Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры (Рис. 2).