Лабораторная работа № 11

Изучение культуральных свойств микроорганизмов.

Теоретические пояснения:

Культуральные признаки микробов определяются характером роста их на питательных средах. Будучи постоянными, для каждого вида микроба, они являются важным диагностическим признаком. Для изучения свойств колоний микробы культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний. Чашки с посевом просматривают сначала невооруженным глазом или через лупу, затем помещают их на столик микроскопа вверх дном и просматривают колонии в проходящем свете с объективом малого увеличения и с суженной диафрагмой.

Колонии характеризуют по величине, форме, контуру края, рельефу, поверхности, цвету, структуре и консистенции.

Величина колонии определяется ее диаметром. В зависимости от диаметра различают колонии точечные (диаметр меньше 1 мм), мелкие (диаметр 1—2 мм), средние (диаметр 2—4 мм) и крупные (диаметр 4—6 мм и более).

Форма колонии бывает правильная — круглая, неправильная — амебовидная, ризоидная — корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев (Рис.13).

Рис. 13. Форма колоний: а – круглая; б – круглая с фестончатым краем; в – круглая с валиком по краю; г; д – ризоидная; е – с ризоидным краем; ж –амебовидная; з – нитевидная; и – складчатая; к – неправильная; л – концентрическая; м – сложная

Характер контура края определяют при рассмотрении колонии под лупой или микроскопом с малым увеличением. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные (Рис.14).

Рис.14. Край колоний: а - гладкий; б – волнистый; в – зубчатый; г – лопастный; д – неправильный; е – реснитчатый; ж – нитчатый; з – ворсинчатый; и – ветвистый.

В некоторых случаях четко выраженная линия, отграничивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым.

Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе (Рис.15). Определяется рельеф колонии невооруженным глазом или с лупой при рассматривании сверху и сбоку. Различают: 1) каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы с различно выраженной степенью выпуклости, которые в вертикальном разрезе представляют собой сегмент шара и отличаются только длиной радиуса. Колонии слабовыпуклые имеют большую длину радиуса; куполообразные — меньшую; 2) колонии плосковыпуклые с плоским верхом, пологими или круто обрывающимися краями; имеют в вертикальном разрезе форму трапеции; 3) колонии конусообразные, имеющие в вертикальном разрезе форму треугольника: 4) колонии с приподнятой в виде соска серединой и валиком по периферии; 5) колонии с вдавленным центром; 6) колонии плоские, стелющиеся по поверхности среды.

Рис. 15. Профиль колоний: а – изогнутый; б – кратерообразный; в – бугристый; г – врастающий в агар; д – плоский; е –выпуклый; ж – каплевидный; з – конусовидный.

Поверхность колонии изучают с помощью лупы или под микроскопом при малом увеличении. Поверхность колоний бывает матовая или блестящая с глянцем, сухая или влажная, гладкая или шероховатая. Гладкие колонии обозначают буквой S (smooth), шероховатые — буквой R (rough), что означает соответственно «гладкий» и «шероховатый». Механизм формирования гладких и шероховатых форм колоний обусловлен различием процессов клеточного деления. Микробные клетки в колониях S-форм располагаются, соприкасаясь своими боковыми поверхностями, клетки R-форм, сохраняя при делении цитоплазматические мостики, образуют цепочки, которые, накладываясь, друг на друга, обусловливают шероховатую поверхность и неровный край колонии. Переход S-форм в R-формы наблюдается при диссоциации. Явление диссоциации у патогенных микробов наблюдается под действием антибиотиков - и химиотерапии, факторов специфического иммунитета, формирующихся в течение инфекционного процесса, а также факторов внешней среды. Среди шероховатых форм колоний различают: складчатые, гирозные, по виду напоминающие исчерченную извилинами поверхность мозга; бородавчатые, концентрически или радиально исчерченные; шагреневые, т.е. мелкозернистые.

Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

Структура колоний определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре. У пигментированных колоний и колоний, не пропускающих света, она не определяется.

По характеру структуры различают следующие виды колоний:

1) гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры;

2) зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко - и грубозернистые;

3) нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии.

Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой.

Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают:

1) пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла;

2) вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей;

3) волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соответствующей величине и форме колонии;

4) хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли.

Цель работы: изучить культуральные свойства микроорганизмов.

Материалы и оборудование: чашки Петри с микроорганизмами, бинокуляр, лупа.

Ход работы:

Описать культуральные свойства 3 микроорганизмов, выросших на чашке Петри с мясо-пептонным агаром. При описании колоний бактерий определяют их диаметр в миллиметрах, пигментацию, форму (точечная, круглая, волокнистая, неправильная, ризоидная), высоту, профиль (плоский, высокий, выпуклый), вид края. Край колонии может быть гладким, волнистым, лопастным, зубчатым, волокнистым, складчатым и т. д. Для рассмотрения краев используют бинокуляр. Следует описать также и поверхность колоний, которая бывает гладкой, блестящей, шероховатой, тусклой, неровной, гранулированной матовой, мукоидной, слизистой. Отмечают степень прозрачности колоний (прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные) и их консистенцию при проверке иглой: маслянистую, вязкую, сухую. На характеристики колоний могут влиять среда, возраст культуры, условия культивирования. Результаты занести в виде таблицы.

Вопросы для самоконтроля:

1. Какие критерии используют для описания культуральных свойств микроорганизмов.

2. Чем отличается S-форма в R-формы?

3. Чем характеризуется структура колоний микроорганизмов?

4. Почему культуральные признаки колоний микроорганизмов являются диагностическими?