Лабораторная работа № 10

Микрофлора воздуха. Количественный учёт микроорганизмов.

Теоретические пояснения:

Воздух не содержит питательных субстратов, нужных для развития микроорганизмов. Кроме того, солнечная радиация, смена температуры и другие факторы оказывают неблагоприятное воздействие на микроорганизмы. Несмотря на это, в воздухе постоянно находится значительное количество микроорганизмов, которые попадают в воздух с пылью с поверхности почвы. Наиболее часто в воздухе встречаются споры грибов и бактерий, пигментные сапрофитные бактерии, плесневые и дрожжевые грибы, различные кокки. Видовой состав микрофлоры атмосферы носит случайный характер и потому сильно колеблется. Среди микроорганизмов преобладают пигментные формы стрептококков, сарцин и дрожжей, которые более устойчивы (за счет наличия каротиноидов) к ультрафиолетовым лучам, а также споры бак-терий и грибов. Очень богат микроорганизмами воздух закрытых помещений, особенно таких, где неизбежно массовое хождение людей, сопровождающееся поднятием пыли. Например, в школах до занятий численность бактерий обычно не превышает 2 тыс. в 1 м³, а после занятия – десятки тысяч. В воздухе жилых помещений, поликлиник и больниц обнаруживаются в значительном количестве болезнетворные микроорганизмы, которые неустойчивы к действию света и высушиванию, поэтому большинство из них гибнет. Однако туберкулезные палочки, патогенные стрептококки и стафилококки хорошо переносят высушивание, в связи с этим воздух может быть источником инфекционных заболеваний.

Санитарная оценка воздуха помещения осуществляется по двум микробиологическим показателям: общему количеству бактерий и количеству санитарно-показательных микроорганизмов в 1м³воздуха. Для обнаружения микроорганизмов в воздухе предложено большое количество методов и приборов, позволяющих определять как общее количество, так и состав микрофлоры. В основу методов положены два принципа: оседание (седиментация) и засасывание (аспирация). Простейший – метод Коха, основанный на оседании микроорганизмов, капелек жидкости и пылинок под влиянием силы тяжести на поверхность агара открытой чашки Петри. Метод Кротова основан на ударно-прибивном действии струи исследуемого воздуха, проводится с помощью прибора Кротова. Ни один из предложенных методов не позволяет уловить и подсчитать все микроорганизмы, лучше использовать сочетание нескольких методов.

Бактериальная загрязненность воздуха определяется по количеству колоний, выросших в чашках Петри на МПА. В. Л. Омельянским установлено, что за 5 минут при спокойном состоянии воздуха на площадь в 100 см² оседает приблизительно столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха. Рассчитав площадь питательной среды в чашке и зная количество выросших на ней колоний микробов, можно определить количество микроорганизмов, содержащихся в 1м³воздуха.

Критерии чистоты воздуха следующие: в воздухе операционных не допускается присутствие микроорганизмов. Микробное число для пищевых учреждений – не более 500 клеток в 1м³, для жилых помещений – до 1500 клеток в 1м³.

Цель работы: провести количественный анализ микрофлоры воздуха учебных аудиторий.

Материалы и оборудование: стерильные чашки Петри, стерильный мясо-пептонный агар в пробирках, водяная баня, электроплитка, спички, спиртовка, восковые карандаши, микроскопы, предметные стекла с углублениями и без них, покровные стекла, краски – нужны при выполнении пунктов 3, 4 и 5 хода работы, термостат, счетчик колоний микроорганизмов.

Ход работы:

1.В чашки Петри разливают из пробирок расплавленный на водяной бане мясопептонный агар. При разливе крышку чашки Петри открывают не полностью, а настолько, чтобы под нее вошло горлышко пробирки. Верхнюю часть пробирки при разливе обжигают над пламенем спиртовки.

Разлив производится на строго горизонтальной поверхности, чтобы агар распределился равномерно по дну чашки. С этой же целью сразу, после того как агар выльют в чашку и закроют ее крышкой, чашку двигают по столу вращательными движениями до застывания агара.

2. В избранном для анализа микрофлоры воздуха помещении чашки ставят на горизонтальную поверхность и открывают крышки на 5 мин (время условное, можно избрать и более продолжительное). Исследователь должен, находиться вдали от чашек. Затем чашки закрывают, помечают восковым карандашом и помещают в термостат с температурой 28°С. Через 48 чна поверхности наблюдают развитие колоний микроорганизмов.

3. Производят подсчет выросших на агаре колоний бактерий и грибов. Для подсчета при большом количестве колоний чашку Петри с нижней стороны делят восковым карандашом на секторы. В каждом из них подсчитывают колонии отдельно, а затем суммируют их общее количество. Чашечный метод не позволяет учесть объем воздуха, из которого осели микроорганизмы, развившиеся на поверхности агара. Поэтому им пользуются для ориентировочного и сравнительного определения микробиологической загрязнённости воздуха. Например, сравнивают воздух аудитории до занятий и после них, разных по своему назначению помещений и пр.

Результаты помещают в таблицу:

Вопросы для самоконтроля:

1. По каким показателям осуществляют санитарную оценку воздуха?

2. Какие микроорганизмы могут существовать в воздухе?

3. Чем отличается метод Коха от метода Кротова?

4. Каковы нормы микробного числа воздуха помещений?