2015-03-20
329
Принцип метода: активность ферментов ЛДГ и пируватдекарбоксилазы определяется по убыли субстрата, об активности которого судят по качественной реакции.
Материальное обеспечение:
апофермент пируватдекарбоксилаза
ТДД, ПВК, буферный раствор рН 7,4
Динитрофенилгидразин
Пробирки, пипетки, штативы, термостат
Ход работы:
Содержание пробирок Контроль Опыт
1.Апофермент лактатдегидрогеназы 0,5 0,5
2.НАД - 1,0
3.Буферный раствор рН 7,4 1,0 1,0
4.Лактат 1,0 1,0
5.Бидистиллированная вода 1,0
Содержимое обеих пробирок инкубируют 15 минут при + 37 град С.
После инкубации выполняют качественную реакцию на лактат с реактивом Уффельмана.
Окраска растворов:
В обеих пробирках проводят реакцию Уффельмана на молочную кислоту.
Для этого вначале готовится реактив Уффельмана: к 20 кап. 1% раствора фенола необходимо добавить 1-2 капли раствора хлорного железа. Получается раствор, окрашенный в фиолетовый
цвет, - фенолят железа.
Раствор фенолята железа делят на две части. К одной из них приливают содержимое контрольной пробы, к другой – содержимое опытной пробы. В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую благодаря образованию молочнокислого железа.
ВЫВОДЫ:
побп преподавателя:
Приложение 1
