Три порции расплавленного 3%-ного агара смешивают в соотношении 1:1 соответственно с антиглобулиновыми сыворотками против IgM, IgG и IgА. Этими смесями покрывают три стеклянные пластины. В застывшем агаре каждой пластины делают лунки, в которые вносят по 0,2 мкл стандартной сыворотки с известным содержанием иммуноглобулинов трех классов (М, G и А): неразведенной, и в разведениях 1:2, 1:4, 1:6 и 1:8. В другие лунки каждой пластины вносят испытуемые сыворотки, взятые от обследуемых людей, в которых хотят определить содержание IgM, IgG и IgА. После суточного выдерживания во влажной камере при 4°С измеряют диаметры образовавшихся колец преципитации с разведениями стандартной сыворотки на каждой из трех пластин и строят калибровочные кривые, отражающие концентрацию IgM, IgG и IgА в этой сыворотке (dзоны= f (СIg)). Затем измеряют диаметры колец с исследуемой сывороткой (на трех пластинах) и по калибровочным кривым определяют концентрацию IgM, IgG и IgА в сыворотках обследуемых.
Исходный уровень содержания иммуноглобулинов в стандартной сыворотке:
|
|
IgG – 8,41 мг/мл (133 МЕ/мл)
IgM – 1,12 мг/мл (109 МЕ/мл)
IgA – 1,55 мг/мл (104 МЕ/мл)
Протокол
Цель:
Результаты определения иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке
Иммуноглобулин | Калибровочный график | Содержание в исследуемой сыворотке, мг/мл | Радиальная иммунодифузия по Манчини |
IgG | Рис. с обозначениями | ||
IgM | |||
IgA |
Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Соответствуют ли содержание иммуноглобулинов в сыворотке норме? 2. Что может быть причиной изменения содержания иммуноглобулинов?)
занятие №6 : | Главный комплекс гистосовместимости НLA-типирование |
УЧЕБНАЯ Цель: | 1. Изучить строение и роль HLA-системы во врожденном и адаптивном иммунитете 2. Познакомиться с методом HLA-типирования. |
Вопросы для подготовки
1. Главный комплекс гистосовместимости (МНС). Генетическая структура локуса. Гены МНС I, II и III классов.
2.Строение молекул МНС I и II классов. Антигенсвязывающая щель и ее роль в иммунном ответе.
3. Методы исследования и типирования HLA (ПЦР, ДНК-гибридизация).
4. HLA и заболевания человека, механизмы.
Задания для подготовки
Заполнить таблицу «Антиген-представляющие молекулы»:
Свойства молекул | МНС I | МНС II | Другие |
Клеточное распределение | |||
Локализация в клетке | |||
Тип эпитопа | |||
Место и условия связывания с эпитопом |
Практическая работа
Р а б о т а №1
Цель: Овладеть методикой проведения и оценки результатов HLA-типирования
Задание. Используя готовые демонстрации познакомиться с методикой проведения HLA-типирования. Оформить протокол.