double arrow

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я. Три порции расплавленного 3%-ного агара смешивают в соотношении 1:1 соответственно с антиглобулиновыми сыворотками против IgM


Три порции расплавленного 3%-ного агара смешивают в соотношении 1:1 соответственно с антиглобулиновыми сыворотками против IgM, IgG и IgА. Этими смесями покрывают три стеклянные пластины. В застывшем агаре каждой пластины делают лунки, в которые вносят по 0,2 мкл стандартной сыворотки с известным содержанием иммуноглобулинов трех классов (М, G и А): неразведенной, и в разведениях 1:2, 1:4, 1:6 и 1:8. В другие лунки каждой пластины вносят испытуемые сыворотки, взятые от обследуемых людей, в которых хотят определить содержание IgM, IgG и IgА. После суточного выдерживания во влажной камере при 4°С измеряют диаметры образовавшихся колец преципитации с разведениями стандартной сыворотки на каждой из трех пластин и строят калибровочные кривые, отражающие концентрацию IgM, IgG и IgА в этой сыворотке (dзоны=f(СIg)). Затем измеряют диаметры колец с исследуемой сывороткой (на трех пластинах) и по калибровочным кривым определяют концентрацию IgM, IgG и IgА в сыворотках обследуемых.

Исходный уровень содержания иммуноглобулинов в стандартной сыворотке:

IgG – 8,41 мг/мл (133 МЕ/мл)

IgM – 1,12 мг/мл (109 МЕ/мл)

IgA – 1,55 мг/мл (104 МЕ/мл)




Протокол

Цель:

Результаты определения иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке

Иммуноглобулин Калибровочный график Содержание в исследуемой сыворотке, мг/мл Радиальная иммунодифузия по Манчини
IgG     Рис. с обозначениями
IgM    
IgA    

Вывод: (Ответить на вопросы: 1. Соответствуют ли содержание иммуноглобулинов в сыворотке норме? 2. Что может быть причиной изменения содержания иммуноглобулинов?)


занятие №6: Главный комплекс гистосовместимости НLA-типирование
УЧЕБНАЯ Цель: 1. Изучить строение и роль HLA-системы во врожденном и адаптивном иммунитете 2. Познакомиться с методом HLA-типирования.

Вопросы для подготовки

1. Главный комплекс гистосовместимости (МНС). Генетическая структура локуса. Гены МНС I, II и III классов.

2.Строение молекул МНС I и II классов. Антигенсвязывающая щель и ее роль в иммунном ответе.

3. Методы исследования и типирования HLA (ПЦР, ДНК-гибридизация).

4. HLA и заболевания человека, механизмы.

Задания для подготовки

Заполнить таблицу «Антиген-представляющие молекулы»:

Свойства молекул МНС I МНС II Другие
Клеточное распределение      
Локализация в клетке      
Тип эпитопа      
Место и условия связывания с эпитопом      

Практическая работа

Р а б о т а №1

Цель: Овладеть методикой проведения и оценки результатов HLA-типирования

Задание. Используя готовые демонстрации познакомиться с методикой проведения HLA-типирования. Оформить протокол.







Сейчас читают про: